利用噬菌体展示技术筛选白介素4受体特异性结合小肽.PDFVIP

复旦大学 政学者论文集 2002 利用噬菌体展示技术筛选 白介素4 受体特异性结合小肽 任红霞 摘要: 噬菌体展示是一种九十年代以来发展起来的对于蛋白质功能研究非常有用的技术工具 在生命科学 的多个研究领域 如肿瘤治疗 新药开发和疫苗制造等 均有广泛应用 白介素4 interleukin 4, IL-4 是 一个多功能的细胞因子 在调控免疫应答的过程中起到关键的作用 IL-4 发挥其生理功能需要依赖与白介 素 4 受体复合物 interleukin 4 receptor, IL-4R 结合,及其下游信号级联式放大 在本研究中 由人外周血 单核细胞来源的总 mRNA 反转录出白介素 4 受体 链 cDNA,将其胞外段在大肠杆菌体系中表达 将纯化后 的蛋白作为靶蛋白 利用噬菌体表面展示技术得到与其特异性结合的小肽 可进一步用于未来体内和体外 的研究 Abstract: Phage display is a very useful tool for the functional study in very diverse scientific areas, such as drug screen. Interleukin 4 (IL-4) is a pleiotropic cytokine which plays a critical role in the shaping immune responses. Its effects depend upon binding to and signaling through a receptor complex consisting of the IL-4R chain and the common gamma chain ( c), resulting in a series of phosphorylation events mediated by receptor-associated kinase. In this study, the cDNA of the IL-4R chain extracellular domain is obtained by RT-PCR from the peripheral blood mononuleate cells (PBMCs). After it is expressed in E.coli., the protein is purified by metal chelate affinity chromatography. A random peptide library displays on bacteriophage M13 was used to screen against the purified protein, and peptide motif was emerged after 3 rounds of panning. This successful example proved that it is possible to identify receptor agonists/antagonists through the screens of phage display libraries, and thus can be used on further in vitro or in vivo studies. 关键词 噬菌体展示 phage display 白介素4 受体 Interleukin 4 Receptor 哮喘 asthma 前言 (1) 噬菌体展示 phage display 近来基因组和蛋白质组数据的大量丰富使我们能够在更加坚实可靠的基础上去设 计和发现新的生物分子 应用于制药 农业 工业及环境等多个领域 因此 基因工程 和理性设计必将会对未来的生活造成更加深刻的影响 但是 理性的设计不是唯一的选 择 与之相对的还有