磁珠富集法开发长臀鮠微卫星分子标记.pdfVIP

贵州农业科学 2016，44(7)：14～17 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]1001—3601(2016)07—0287—0014—04 磁珠富集法开发长臀脆微卫星分子标记 孔 杰，蒋晓红 ，周 洲，张竹青，周 路，李道友 (贵州省水产研究所 ，贵州 贵阳 550025) [摘 要]为长臀兢遗传育种、种质鉴定和种苗流放等提供理论依据，采用磁珠富集法开发长臀鲍 (Cran0gZanisbouderius)微卫星分子标记，筛选获得 阳性克隆进行分析 ，选取侧翼较长的序 列，用 Primer Premier5．0设计合成引物。结果表明：从 596个 白斑 中筛选获得 8O个 阳性克隆，测序 获得微卫星序 列 47 个，其 中完美型 31个(66 )，非完美型 14个 (3096／)，复合型 2个 (4 )。设计合成 32对引物 ，通过优化反应 条件 ，得到27对引物能扩增特异条带 ，其中多态性 引物 24对。 [关键词]磁珠富集；长臀能；微卫星标记 [中图分类号]$965．299 [文献标识码]A DevelopmentofMicrosatelliteinCranoglanisbouderiusbyMagneticBeads KONG Jie。JIANG Xiaohong ，ZHOU Zhou，ZHANG Zhuqing，ZHOU Lu，LIDaoyou (AquacultureScienceInstituteofGuizhouProvince，Guiyang，Guizhou550025，China) Abstract：To provide the theoreticalbasis for genetic breeding， germplasm identification and releasing．M agneticbeadsenrichedmethodwasusedtoisolatemicrosatellitesfrom C．bouderius，through sequencingandanalysisthepositivecolonies，therepeatswhich contained enough flankingregionwere obtainedto design 32microsatelliteprimersby thesoftwarePrimerPremier5．0．Results：8O positive colonieswereobtainedthrough596whitespots．Sequencingofthe80positivecoloniesconfirmedthat47 microsatellitesequenceswereobtained．Ftom thesesequences，31sequences(66 )wereperfectrepeats， 14 (300o) were imperfect repeats， and two sequences(4 )were compound repeats． 27 pairs of microsatelliteprimersusedsuccessfullytoamplifyspecialfragmentsatappropriateannealingtemperature， and24pairsofthem werepolymorphism withinspecies． Kevwords：enrichmentbymagneticbeads；Cranoglanisbouderius；microsatellitemarker 长臀能 (Cranoglanisbouderius)，俗称牛毛鱼、 用奠定基础 。 牯鱼 ，隶 属 鲇 形 目 (Siluriforrnes)、长 臀 鲍 科 1 材料与方法 (CrdDZ鲫 d 8P)、长臀娩属 (Cranoglanis)，是珠 江水系特有的名贵经济鱼类 ，在 《中国濒危保护动物 1．1 试验样品 红皮书》中被列为易危鱼类 ]。其分布于