有机染料的吸附柱色谱..ppt

一、实验目的 1、学习柱色谱分离的基本原理。 2、学习和掌握柱色谱的操作方法。 3、测定柱色谱分离回收率。 色谱分离效果与固定相的颗粒直径大小、含水量有关，也与流动相和被分离物质的极性的极性。被分离物质的极性、吸附剂的活性和洗脱的极性之间的关系如图所示。 氧化铝是一种极性吸附剂，对极性较强的物质的吸附力强；对极性较弱的物质的吸附力较弱。氧化铝和硅胶的活性与含水量有关。一般分离用2级活性的吸附剂。 色谱柱可有干法和湿法两种装柱方法。 干法装柱的方法是：在干净的色谱柱底部塞少量脱脂棉 （或玻璃棉）使平整，再放一片与柱内径相当的滤纸，关闭 活塞，从干漏斗分批加入固定相（载体），边装边轻轻敲击 柱子，使装填紧密均匀并到适宜高度，再在柱顶部放上2片 与柱内径相当的滤纸，打开活塞，加入适宜溶剂润湿柱身。 湿法装柱的方法是：在干净的色谱柱底部塞少量脱脂棉 （或玻璃棉）使平整，再放一片与柱内径相当的滤纸，关闭 活塞，加入适宜溶剂至柱高度的一半，将调成悬浊液的固定 相不断慢慢地倒入柱内，同时需打开活塞，使溶剂慢慢流出 （液体下滴速度为每秒1滴），直到固定相的沉降不再变动 为止，然后在柱顶部放上2片与柱内径相当的滤纸。 仪器： 具塞色谱柱(10cm×1cm)1支，容量瓶(25mL)3个，烧杯 (50mL)1个，吸量管(1mL)1支，玻璃棒1根，滴定台带滴定管 夹，滴管1个，小漏斗1个， 722光栅型分光光度计，小剪刀 (共用)。 试剂： 色谱用中性氧化铝，95％乙醇，0.1mol·L-1HCl溶液, 0.1g·L-1甲基橙和0.1g·L-1亚甲基兰乙醇溶液(H2O∶95％乙 醇=1∶1)。 材料： 脱脂棉，擦镜纸，滤纸片。 四、实验步骤 3、回收率测定 将分离出的亚甲基蓝溶液用95％乙醇定容，甲 基橙溶液用0.1mol·L-1HCl溶液定容，分别以蒸馏水 为参比，在450nm处测定甲基橙溶液的吸光度A1， 在661nm处测定亚甲基兰溶液的吸光度A2。 准确移取0.50mL有机染料混合溶液于25mL容 量瓶，用0.1mol·L-1HCl溶液定容，分别测定在450 nm和661nm处的吸光度A1′和A2′，按η1=A1/A1′ 和η2=A2/A2′计算各组分的回收率。 五、实验关键 1、装柱要紧密，要求无断层、无缝隙、柱顶 面装填平整、柱身安装要垂直。 2、从润洗柱身开始导分离结束的整个过程 中，始终保持有溶剂覆盖吸附剂。 3、洗脱剂应少量多次加入，维持一定的压力 差，加入的洗脱剂将压实吸附剂，洗脱速度减 慢。 4、洗脱分离液应全部收集，二种色带的洗脱 液不要被交叉收集。 5、试样溶液应准确移取。 6、应使用同一套比色皿测量溶液吸光度，改 变入射光波长λ，需重新调整透光度0和100％。 操作注意事项 1、避免液态物质加入时冲击吸附剂表面引起柱 内各处洗脱剂移动速度不同。 2、试样溶液应在固定相上面小心加入，避免溅 到色谱柱内壁或在内壁沾附太多；沾附在色谱柱内 壁上的试样溶液需用少量洗脱剂淋洗，使试样液全 部进入固定相中。 3、应控制柱分离的洗脱速度，本实验中不能采 用洗耳球加压的方法来加快洗脱速度。 4、需计算有机染料的色谱分离回收率，应准确 加入试样溶液的定容。 七、思考题 1、若色谱柱装填不紧密均匀，对分离结果又和影响？ 如何避免？ 2、为什么极性大的组分要用极性大的溶剂洗脱？ 3、根据本实验的分离结果，判断甲基橙和亚甲基兰的 极性大小？ 4、在氧化铝柱子上分别分离下列两组混合物时，哪一 个组分先被洗脱下来? （1）邻硝基苯胺和对邻硝基苯胺 （2）偶氮苯和4-苯偶氮苯偶氮-2-萘酚（苏丹III） HO －N＝N－ －N＝N－ －N＝N－ 5、在回收率测定时，需配制有机染料混合溶液，为什 么要用0.1mol·L-1HCl溶液定容？ 6、根据实验结果，分析影响两种染料回收率不同的原因。 * * 有机