代谢调节与代谢工程1.ppt

代谢调节与代谢工程1 分离耐末端代谢产物调节的突变株的方法 其机制如下：在正常情况下，细胞中过量末端代谢产物(如氨基酸A)会抑制和阻遏参与其生物合成途径的酶。 氨基酸A可用于蛋白质的合成，氨基酸类似物A (又称抗代谢物)，具有与氨基酸A一样的调节作用，但不能用于合成蛋白质。 代谢调节与代谢工程1 分离耐末端代谢产物调节的突变株的方法 经诱变处理的野生型菌株在含有氨基酸类似物A的培养基中培养时，因为绝大多数细胞不能合成氨基酸A而死亡，只有那些对类似物A不敏感的抗性突变菌株能合成氨基酸A，方能形成菌落。 代谢调节与代谢工程1 分离耐末端代谢产物调节的突变株的方法 在这些突变菌株中，有些可能是由于参与氨基酸合成的酶的结构起了变化，对类似物 A不敏感(抗反馈抑制的突变株)，另一些可能是由于编码参与氨基酸A合成酶的操纵子的控制基因发生了突变，编码出没有活性的调节蛋白而对类似物A不敏感，(抗反馈阻遏的突变株)。 由于这些菌株的氨基酸A的合成失去控制，从而能过量地生产氨基酸A。 其他方法 代谢调节与代谢工程1 * * * 代谢调节与代谢工程1 这显然是由于分解其它碳源的酶受阻遏所致。 但耐葡萄糖阻遏的突变株却无这种延迟现象。 故轮番让菌生长在葡萄糖培养基、琥珀酸培养上，可筛得耐分解代谢物阻遏的突变株。 (2) 鉴别性培养基 含有葡萄糖的琼脂平板 涂布诱 变后的 菌体 喷上O-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷 (ONPG) 突变型 野生型 解除碳源调节突变株的选育 代谢调节与代谢工程1 . 解除碳源调节突变株的选育 （3) 特殊氮源 其筛选原理是，用葡萄糖为碳源，受阻遏酶的底物作为唯一的氮源，用这种培养基的琼脂平板培养筛选经诱变的菌株。 代谢调节与代谢工程1 在葡萄糖-脯氨酸琼脂平板上可筛选出耐分解代谢物阻遏的脯氨酸氧化酶的生产菌株(鼠伤寒杆菌突变株)。 因脯氨酸氧化酶的合成受葡萄糖的阻遏，野生型亲株不能生长在这样的培养基上，只有耐分解代谢物阻遏的突变株才能从氧化脯氨酸中取得生长所需的氮源。 代谢调节与代谢工程1 一般，组氨酸降解酶类受葡萄糖的阻遏，而从组氨酸的分解代谢中获得氮源又是菌的生长所必需。 将产气气杆菌连续移植到一含有葡萄糖及组氨酸为唯一的氮源的培养基上，用于筛选耐分解代谢物阻遏的突变株。 故能在这种培养基上生长的必然是能耐葡萄糖阻遏的突变株。 (4) 葡萄糖结构类似物 ① 特性：2-dG和3-mG既不被微生物代谢又具有分解阻遏作用，因此可用来筛选抗分解阻遏的突变株。 2-dG 3-mG 解除碳源调节突变株的选育 ② 筛选方法 培养基要求含低浓度2-dG或3-mG及一种生长碳源，该碳源必须经相应的诱导酶水解才能被微生物同化利用。 ③ 抗性突变株的性质 应用2-dG或3-mG不仅可以定向选育分解阻遏脱敏突变株，也可有效地分离到高产菌株。 解除碳源调节突变株的选育 (4) 葡萄糖结构类似物 2.解除氮源分解调节突变株的选育 氮源分解调节：指含氮产物的酶受快速利用的氮源阻遏。 类型：细菌、酵母、霉菌等微生物对初级代谢产物的氮降解物具有调节作用。次级代谢的氮降解物的阻遏主要指铵盐和其他快速利用的氮源对抗生素生物合成具有分解调节作用。 实例：筛选芽孢杆菌中耐氨基酸菌株，是提高蛋白酶产量的一种有效方法。 代谢调节与代谢工程1 耐分解代谢物阻遏的突变株的获得 其它通常受氨阻遏的酶有：亚硝酸还原酶、硝酸还原酶、固氮酶、乙酰胺酶、脲酶、黄嘌呤脱氢酶、组氨酸酶，天冬酰胺酶、脯氨酸氧化酶和运输尿素及谷氨酸的渗透酶。氮分解代谢物的阻遏似乎与同化氨的酶有关。 代谢调节与代谢工程1 氮分解代谢物的调节 许多催化分解含氮基质的酶的合成受NH3或可被菌株迅速利用的氨基酸的阻遏。 因此，许多芽孢杆菌在含有一些氨基酸的培养基中生成的蛋白酶很少，从培养基中除去这类化合物常可大大增加酶的产量。 生长在各种培养基上的细菌在限制氨浓度下，同样会增加蛋白酶的形成。(用此原理也可防止目的蛋白的降解) 代谢调节与代谢工程1 氮分解代谢物的调节 通过耐甲胺的突变作用可除去NH3对酶生成的阻遏控制。 代谢调节与代谢工程1 反馈调节 氨基酸、嘌呤和嘧啶核苷酸生物合成的控制总是以反馈调节方式进行。 其生理意义在于避免物流的浪费与不需要的酶的合成。 代谢调节与代谢工程1 反馈调节 反馈抑制一般针对紧接代谢途径支点后的酶； 而阻遏往往影响从支点到终点的酶。 代谢调节与代谢工程1 代谢调节 降解性酶类通常是通过诱导作用和分解代谢物的调节来控制的。 已知有两种主要类型的反馈调节，反馈抑制和反馈阻遏。 代谢调节与代谢工程1 反馈调节 反馈抑制作用是未端代谢产物