BS-83滤液活性对真菌对峙.doc

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BS-83滤液活性对真菌对峙

標題: 叢枝菌感染玉米之培養繁殖 第5組章懷升林辰儒林昀澍陳品全楊佑彬蔡亞修 2015/01/20 實驗目的 1.利用玉米作為寄主,使菌感染玉米根部,進而觀察在不同比例帶菌土的混和下,玉米的生長情形,找出最適合的混和比例 2.將6組樣本分別作染色切片,觀察每一樣本的感染情況 前人研究(背景資料) 近年來由於生物肥料使用推廣,在內生菌根菌方面已實際應用於洋香瓜及西瓜之育苗,將內生菌根菌與育苗之介質或泥土混合置於穴盤或育苗袋上,有助於幼苗之成活率且瓜苗健旺根部發育佳,可提早一星期採收,果實品質顯著提高,同時磷肥之施用量亦較不接種菌根菌之處理減少一半以上,生產成本因而降低,進而增加收益。 材料與器材 樣本培養: 1.帶菌之土壤及菌根(五葉松)?玉米種子?培養土?穴盤 2.培養基?手術刀?鑷子?無菌水?75%酒精?3N次氯酸鈉(無菌培養) 切根染色: 1N HCl?2.5N KOH?染色劑(00ml甘油+90 ml水+10ml 1N HCl +0.1g甲基藍)? 75%酒精?無菌水 試管?燒杯?加熱器?溫度計?鑷子?手術刀?載玻片?顯微鏡?磁石?滴管 菌株培養 2.先栽培後感染:先以培養土將玉米培養到根系開始發展(約二~三週的時間)再將原本的土 依比例 (100%,50%,25%,0%)換成帶菌之介質,日後再觀察生長情況 3.直接種於帶菌介質中:這是嘗試玉米若直接在帶菌介質中栽培是否可得到更好之結果, 依比例(100%,50%,25%)種植 (結果:本身介質不適合玉米生長,所以效果不佳。) ※本次實驗取上方標藍色記號的五組及松樹的菌根共六組來做感染觀測 實驗方法 1.先將玉米種子用清水沖泡過 2.用酒精擦拭種子表面 3.配置3%次氯酸鈉 4.準備2瓶無菌水 5.將玉米種子放置錐形瓶並加入次氯酸鈉 6.搖至瓶內充滿泡泡 7.進入無菌操作台,將瓶內的次氯酸鈉倒掉 8.並加入無菌水搖至種子表面無次氯酸鈉殘留(泡泡) 9.等待種子稍微晾乾後即可以接種 切根染色:1.用清水將根洗淨將根放入試管中,加入2.5KOH (淹過根頂部),以水浴法90oC煮10~20分鐘(視材料根之軟硬而增減時間) 倒出KOH,並以清水沖洗三次 以1HCl ,酸化五分鐘 倒出HCl,加入染色劑,以水浴法90 oC煮分鐘(視材料根而增減時間)倒出染色劑, 7.切片,在顯微鏡下觀察1.感染時間不夠.菌尚未感染至寄主根部 2.所採之土壤本身就不帶有所要菌種 3.顯微鏡放大倍率不足,無法觀測到菌 4.樣本切片太厚,使顯微鏡觀測不到 5.栽培方式,環境(濕度、溫度、介質)不利於菌種生長 6.染色過程錯誤,將該菌種消滅導致觀測時找不到 7.寄主選擇錯誤,菌根無法感染寄主 8.染色時間不夠或太久導致觀測不到菌種 實驗記錄 結果與討論 這次實驗因為切片的技術經驗及顯微鏡的放大倍率不足,,,,,,,式盆栽菌根菌種原繁殖技術,氣霧式叢枝內生菌根種原生產技術,氣霧式菌種繁殖法,係在氣霧栽培箱內,將營養液打成霧狀後,經接種的植株懸浮於箱內,而直接產孢於空氣中,氣霧式栽培法培養的宿主,可在無土的情況下大量生產菌根種源,且在老根採收後,新根又繼續生長,造成種源生產既快速又不中斷的生產線,氣霧式栽培法所生產的菌根經採收風乾後,質量輕可以直接郵寄或混合其它介質,直接變為商品。由於氣霧式培養法所生產的菌種遠較砂耕法來得乾淨且少污染,因此,培養法的研究將有助於提升菌根菌無土介質繁殖技術的開發,甚至能突破根器官培養法目前所面臨的瓶頸,,,, 實驗日期:/12/23~104/01/19 植株生長情形: 1/4混合比例生長最好,, 植株根系比較: 在根系發展的部分,,,, 純原土樣本切片染色 可以發現少數的菌體 1/2混合比例樣本切片染色 可以發現少數的菌體 1/4混合比例樣本切片染色 菌體數量明顯較多 純培養土樣本切片染色 沒有菌體的發現 無菌培養樣本切片染色 沒有菌體的發現且因為根系較纖細, 原根(松)樣本切片染色 由於解頗顯微鏡放大倍率不足,,

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