膜片钳之仪器操作与维护篇课件.docVIP

膜片钳之仪器操作与维护篇 1、电极一旦拉制成功后，其尖端必须作进一步的处理。目的之一是为了减小电极内部与溶液之间的电容，即在电极末梢前数微米处，涂敷一层疏水材料，如硅酮树脂（Sylgard）。这种物质能够防止液膜爬上电极。另一目的是为了对电极尖端作优化处理，如同热抛光的方法使电极尖端光滑、周围均匀，以提高实验过程中的封接成功率。 2、关于电极的问题a. 洁净的电极是封接的关键。电极需要在使用前拉制完成放在密闭容器中，通常在12小时内用掉比较好；b. 内液（确切的说是电极液）需要过滤；c. 在电极入水之前可以加一个正压，可以吹开电极尖端的液体及灰尘；d. 如果不用灌流的话，最好bath solution也要过滤。降低噪声的关键是地线和屏蔽，第一地线接地要好；第二要注意将一些容易产生噪声的设备屏蔽好，比如显微镜灯光的电源、电动微超的马达、监视和记录的电脑以及一些可能产生噪声的电源线，总之你可以用排除法一一试验，肯定会降低噪声的，一般降低到几个pA/fA级即可。另外，你的负压也可以用一个“U”形管通过3通管加上。我认为屏蔽很重要哦，以前我在实验中，常遇到电极入水后方波有50HZ干扰，有时还跳动，很是心烦，想了很多办法就是去不掉，包括接地线，镀银丝、参比电极，清洗Holder等等，甚至怀疑仪器有问题，感到有些绝望了！后来发现灌流时干扰明显，把灌流装置控制电源搬到法拉第笼子外，一切就ok了！而且发现只要有电源线进入屏蔽笼，即使没有通电，也有交流干扰，所以所有进入屏蔽笼的电源线都应该用屏蔽线（而不是一般电线）。我体会到在膜片钳实验中一定要“消灭”各种干扰，这样结果才可靠，而消除干扰靠什么？It is 屏蔽！你可以用做铁笼子的铁丝网罩住显微镜电源，若没有屏蔽线，可以用保鲜用的锡纸包裹导线，只要是pA/fA就可以做了！关于干扰的问题我有以下几点看法：屏蔽室是必要的，尽管有时候看起来作用不大，但是如果外界的电磁干扰很大，这时候它的作用就显示出来了。避免干扰的一个原则就是要将屏蔽室内外的各个可能产生电磁干扰的仪器一定要接地，有时候一个仪器有好几个零部件，有些部件之间是绝缘的，此时就要将绝缘的部分分别都接地。同一个部件不要重复接地，有时候也可能产生干扰的。关于显微镜的问题：屏蔽到是没有必要，只要两根线就解决了1）将显微镜的灯罩打开，在内部的螺丝上接出一根线2）在显微镜的臂上的螺丝上接一根线此外，浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰的，有时候开始还挺好，几乎没有干扰，但是在记录的过程中自己什么也没有动，就突然出现干扰了，很大的一部分原因就在此。这个问题曾经也是困扰了我好长时间，体会很深的。接地线到是没有特殊的要求，只要一般的电线就可以了不要让液体流出来（包括灌流和引流的液体），淌到实验台上或是地面上，这也是产生干扰的一个重要的原因。我也很赞成开心果果的意见，实验台和实验仪器一定要整齐有序，恐怕每个实验室也都是这样要求的吧屏蔽线就是用铜网屏蔽电源线，电子市场有卖的。一般用两相线，外面包有一层铜网，需要注意的是：（1）电线规格，我们用的电线直径0.75，这对220V足够了，太细满足不了仪器负荷。（2）屏蔽线的连接，一端接插头的零线，另一端接仪器的外壳（零线），且插座零线要接地（不能虚设）。（3）电线接头处要连接紧密，并用热缩管套牢。 只要灌流装置电源线没有很好屏蔽，即使拔掉插头，仍然有干扰，不信你试着在有干扰时把灌流装置搬离法拉第笼子，看看有什么效果？这种方法就叫排除法（把法拉第笼里的有可能产生干扰的东西一件一件地搬出来，逐渐排除）。浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰的我也遇到过这种情况，建议大家在实验前把浴槽电极固定好。我认识美国KANSAS大学 的一位做膜片钳的教授，他说他的实验室就不用屏蔽，已经运转了十多年了，也没有什么问题。他建议我们也不要用屏蔽，我不知道这样做是否可行，或者国外的实验室本身就与国内不同，他们能不用屏蔽，但我们就不行。说实话，我也认为没有屏蔽怎么可能，但的确开始的时候是没有噪音干扰的，后来也出现了一些噪音，我想屏蔽的作用应该是不可忽视的！硫酸镁和氯化钙其实都是ACSF中的成分，只是我们先把他们配成水溶液，因为如果以固体形式和ACSF中的其他成分一起配制，会产生碳酸镁和碳酸钙沉淀。前两天在安装HOLDER的时候，把银丝弄断了，我去外面的金银商店做了一根，好象比以前的粗一些，弹性不是很好，镀银以后装上去使用，想问问各位，这样是不是回对实验本身产生影响呢？膜片钳的每一部分最好都是厂家的原装产品，尽管银丝是很普通的东西，但在作工和规格上应该还是有差异的。你可以向厂家说明一下情况，向他们索要或购买比较好。玻璃微电极：常用尖端0.5-5μm，向细胞内插入时，需小