MLL-AF9融合基因特异性siRNA抑制THP-1细胞生长－副本.pdfVIP

MLL-AF9 融合基因特异性siRNA 抑制THP-1 细胞生长1 1，2 1 1 1 杨英 ，朱平 ，顾江英 ，刘静 1. 北京大学第一医院血液内科，北京（100034 ） 2. 北京大学医学部继续教育处，北京（100083 ） E-mail ：yangyw70@ 摘 要: 目的：利用具有混合系白血病基因（MLL ）重排的白血病细胞系阐明MLL 基因重 排对白血病细胞生长的影响及其与Hox 基因家族的关系。材料和方法：用特异性siRNA 干 扰单核细胞白血病细胞系THP-1 中MLL-AF9 融合基因表达，观察细胞增殖和凋亡改变，并 检测 Hoxa9 、Hoxa7 、Hoxa5 和Meis1 基因表达水平改变，与干扰 Cos 细胞中野生型MLL 基因结果进行比较。结果：MLL-AF9 融合基因特异性siRNA 转染THP-1 细胞后，细胞增殖 受抑制，细胞凋亡增加；Hoxa5 、Hoxa7 和Meis1 的表达受抑制，而Hoxa9 表达不受影响。 MLL 基因特异性siRNA 转染Cos 细胞后抑制MLL 表达，同样抑制Hoxa5 、Hoxa7 和Meis1 基因表达，而Hoxa9 表达水平不受影响。结论：MLL-AF9 融合基因特异性siRNA 能抑制细 胞生长并促进细胞凋亡。野生型 MLL 基因和 MLL 融合基因的靶基因基本相同，主要影响 下游Hoxa5 、Hoxa7 和Meis1 表达。 关键词：白血病，MLL 基因重排，Hox 基因，siRNA 中图分类号：R733.71 1. 引言 混合系白血病基因（Mixed lineage leukemia ，MLL ）重排是一种再现性染色体异常，可 见于婴儿、儿童和成人的原发性急性髓细胞白血病（AML ）、急性淋巴细胞白血病（ALL ） 以及拓扑异构酶抑制剂治疗引起的继发性白血病。具有MLL 重排的白血病称为 MLL 相关 [1] 。最常见的MLL 基因重排类型是平衡易位，MLL 基因氨基端与另一个基因的羧基 白血病 端融合，形成融合蛋白，已报道有 50 多种基因能与 MLL 基因融合形成融合基因；其次是 与自身融合形成部分串联重复（Partial Tendam Duplication ，PTD ），即MLL PTD ，通常见于 [2,3] 正常核型白血病患者；少数病例还可见到 MLL 基因的扩增 。 MLL 相关白血病通常病程进展迅速，预后较没有重排的患者差，因此 MLL 基因被称为 “臭名昭著” （promiscuous ）的基因。MLL 基因配体多样，致白血病机制复杂多变，引起临 床和基础研究者广泛关注，融合基因主要是通过与具有转录活性的配体结合获得了转录活性 功能区，或与能够形成二聚体的配体结合形成二聚体，导致其下游靶基因 Hox 基因家族的 表达和调控发生异常，从而产生白血病[2] 。MLL 基因与 Hox 基因关系复杂。MLL 基因对于 维持 Hox 基因的正常表达具有重要作用[4,5] 。MLL 相关白血病中 Hox 基因表达异常，以 Hoxa9 、Hoxa5 、Hoxa7 、Hoxa10 等增高为主，其中 Hoxa9 基因增高为明显[6,7] 。Hox 基因功 能之间可能具有重复性，并通过网络调节，一种 Hox 基因不存在时其功能可能通过其它 Hox 基因弥补。MLL 融合基因与下游 Hox 基因之间的关系复杂，尚未充分阐明。 为进一步探讨索MLL 融合基因对白血病细胞生长的影响，及其与 Hox 基因的相互关系， 本文采用 RNAi 技术特异性抑制白血病细胞系 THP-1 中MLL-AF9 融合基因，检测 MLL 基 因下游靶基因Hoxa9 、Hoxa7 、Hoxa5 和 Meis1 等表达水平改变情况，并与干扰 Cos 细胞系 中野生型MLL 相比较，探索 MLL 对下游