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丛枝菌根真菌对丹参内源激素的影响 　　[摘要]该文旨在初步探索接种地表球囊霉（Glomus versiforme，GV）真菌不同时期丹参内源激素含量的动态变化，实验设定对照组和菌根组，测定接种GV菌剂30，60，75，90，105，130 d丹参根系侵染率，同时采用ELISA方法测定内源激素ABA，ZR，GA，IAA，MeJA含量的动态变化。结果表明，接种菌根90 d丹参根部侵染率为90%，基本达到平衡；地上部分鲜重和叶片数显著高于对照组，约为对照组的2.7，1.96倍；除ABA外，丹参接种菌剂75 d地上部分其他内源激素含量均显著低于对照组（P 　　丹参Salvia miltiorrhiza Bunge为唇形科多年生草本植物，是一类菌根营养型植物，能被丛枝菌根真菌侵染，形成典型的菌根结构。前期课题组研究结果表明，AM真菌能促进丹参的生长，提高丹参的抗病性，但其作用机制不清楚，本研究通过盆栽实验，接种AM真菌不同时期丹参体内内源激素脱落酸（ABA）、生长素（IAA）、赤霉素（GA）、玉米素核苷（ZR，属于游离态细胞分裂素）、茉莉酸甲酯（MeJA，茉莉酸衍生物）含量的动态变化，初步探索AM真菌影响药用植物丹参内源激素的作用机制，为后期深入研究内源激素在AM真菌提高丹参次生代谢产物及抗性中的作用奠定基础 1 材料与方法 1.1 仪器 显微镜（Nikon E200型）、高速冷冻离心机HC-3018R；台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，恒温箱，酶标板（40孔或96孔），其他常规器材 1.2 供试种子 供试丹参种子，由山东莱芜丹参种植基地提供，由中国中医科学院中药资源中心黄璐琦研究员鉴定为白花丹参S. miltiorrhiza的种子。供试AM菌Glomus versiforme由三叶草Trifolium repens L.扩繁，用其根段、菌丝体、孢子及其混合物作为菌剂 1.3 实验设计 将丹参种子先在室温下浸泡10 h后，用75%乙醇浸洗30 s，蒸馏水漂洗3次，用10%过氧化氢浸泡消毒5 min，蒸馏水漂洗至无过氧化氢为止，播种至蛭石中，待种子萌发。移栽前进行接种AM菌处理，即接种G. versiforme，每盆接种10 g菌剂，同时以不接种菌剂作为对照CK。采用高10 cm，盆口直径为12.5 cm，盆底直径为8.5 cm的小盆，每盆装入121 ℃高压蒸汽灭菌土-河沙-蛭石 1∶1∶1混合基质，将萌发的丹参转入到小盆中生长，每周浇2次50%的hoagland营养液。温室白天气温20～25 ℃，夜间15～19 ℃，光照12 h，夜间12 h。植物分别于接种30，60，75，90，105，130 d后取样，将地上部分和地下部分剪断，称重后迅速放入液氮中冷冻，-80 ℃保存备用，每个处理重复10次 1.4 菌根侵染率测定 随机选取不同时期CK组和GV组30条根段，根据Trouvelot等[13]的方法测定，并按照菌根侵染和丛枝丰度分级的标准，输入等级参数，用mycocalc软件计算菌根侵染频率（frequency of mycorrhiza in the root system，用F表示），整个根系的菌根侵染强度（intensity of the mycorrhizal colonisation in the root system，用M表示），侵染根段的菌根侵染强度（intensity of the mycorrhizal colonization in the root fragments，用m表示） 1.5 植物激素测定 取上述丹参植物材料1 g，加入 2 mL 样品提取液（含1 mmolL-1二叔丁基对甲苯酚的80%甲醇溶液），液氮中研磨成匀浆，转入10 mL离心管中，4 ℃下提取4 h，1万rmin-1离心15 min，取上清液。沉淀物再加入1 mL上述提取液，涡旋混匀，4 ℃下再次提取1 h，1万rmin-1离心15 min，合并上清液，通过C18固相萃取小柱（预先用甲醇3 mL活化，纯水3 mL平衡），用80%甲醇5 mL洗脱。收集洗脱液，氮气吹干，用样品稀释液[500 mL磷酸盐缓冲液中加0.5 mL聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯（Tween-20），0.5 g明胶]复溶，用于植物激素酶联免疫测定[14] 1.6 数据分析 实验所得数据采用Excel 2010和SPSS 18.0软件进行统计分析 2 结果 2.1 接种GV不同时期丹参根系侵染强度的变化 接种GV 60 d内，丹参根系侵染频率呈快速上升的趋势，60 d丹参根系侵染频率（F）达到86.30%；接种GV丹参整个根系侵染强度（m）在75 d显著增加为（22.7