第3章细胞工程西南大学普通生物学.ppt

　　利用缺体或单体与异附加系杂交、再自交进行染色体代换。 2）利用缺体或单体与异附加系杂交产生染色体代换系 利用二体附加系与单体杂交产生异代换系 利用缺体与多倍体杂交、回交产生异代换系 小偃麦 异代换系 6）原位杂交（in situ hybridization，ISH） （2）异代换系的鉴定 1）染色体构型分析 2）染色体分带技术 3）生化标记（同工酶和蛋白质） 4）分子标记 5）形态标记性状 　　　转移外源基因较理想的方法是导入携有有用基因的染色体片段，而且伴随的额外染色体物质愈少愈好。 （四）染色体片段的转换 　　电离辐射能使染色体随机断裂，断片以新的方式重接可产生各种染色体结构变异。 1、诱导染色体片段转移的方法 （1）利用辐射诱导染色体易位 　　用射线照射携有目标性状的代换系、附加系或双倍体的花粉或植株可产生插入易位或末端易位。 　　通过辐射已经成功地将多个抗病基因从小伞山羊草、长穗冰草、中间冰草、大赖草和黑麦导入普通小麦。 　　利用携有目标性状的代换系或附加系与农艺性状优良的亲本杂交，用杂交当代种子（即单体异代换系或单体附加系）进行照射处理，在后代中选具有外源目标性状、染色体数为2n的植株，再进一步作细胞学鉴定筛选易位系，可较快地将目标基因易位、重组到优良的遗传背景中去。 　　种间和属间杂种经细胞、组织培养可增加亲本染色体间的遗传交换，再生植株中可出现包括易位在内的各种染色体结构变异。 （2）利用细胞、组织培养诱导染色体易位 　　在细胞培养中，产生体细胞变异的原因可能与培养基中的某些成分和培养过程中的理化因素刺激有关。培养条件可诱发染色体断裂和重接。 　　利用携有目标性状的代换系、附加系、双二倍体与农艺亲本的杂种F1进行细胞、组织培养，并结合诱变和筛选将大大提高有用基因的转移效率。 小麦、玉米、棉花等作物存在控制染色体配对的基因。 （3）利用遗传控制体系诱导染色体易位 　 如，小麦5BL上的Phl基因抑制部分同源染色体之间配对。Phl基因的突变体（ph1bph1b）和缺失5B染色体的植株中部分同源配对频率增高，将促进小麦和亲缘物种部分同源染色体的配对和重组。 　　的杀配子基因（gela，Gc-S’1，Gc-S’2和Gc-C）导入小麦后会引起小麦染色体的断裂和融合，将这些基因导入种间和属间杂种将大大提高外源染色体与小麦染色体间易位的频率。 （4）利用杀配子基因诱导染色体易位 山羊草（Ae．speltoides，Ae．longissima，Ae．sharonensis） 柱穗山羊草(Ae．cylindricum)和离果山羊草(Ae．triuncialis) （4）利用分子原位杂交（in situ hybridization，ISH） 2、易位系的鉴定 （1）利用染色体分带技术 （2）利用生化标记（同工酶和蛋白质） （3）利用分子标记 　　在显微镜下利用特种工具对某个特定的染色体片段切割加工。 　　一种是在显微操作仪上用显微刀将某个染色体片段（目标染色体片段）切下来，另一种方法采用激光共聚焦显微镜将非目标染色体片段消除。 （五） 染色体微切割和人工染色体 1、染色体微切割(Chromosome microdissection) 常用的方法 目标染色体片段经蛋白酶裂解后提取出目标片段的DNA，由于目标染色体片段DNA的量很少，最初的染色体微切割需切割分离大量染色体（100～200条）。PCR技术的应用大大促进了染色体微切割、微克隆技术的发展。 　　将微切割获得的染色体或染色体片段DNA用限制性核酸内切酶消化后插入克隆载体，构建成染色体或染色体片段特异性DNA文库。 微克隆 　　染色体微切割目前主要用于构建特定染色体和特定染色体片段的微切割文库。微切割文库可用来筛选目标基因的候选克隆，也可以从中筛选对某个染色体区段有特异性的探针。这类探针在利用高密度分子标记连锁图筛选YAC、BAC文库时非常有用。 　　线状，中间有一个着丝粒把染色体分成两个臂，两臂末端各有一个端粒，在染色体上有数目不等的复制起始点。　　 2、人工染色体（Artificial chromosome） 真核生物的染色体的特征 　　在细胞分裂中期，纺锤丝微管结合到染色体的着丝粒区域的着丝点上，牵动染色体有规则地分配到子细胞中。 染色体的组成元件 着丝粒、端粒和复制起始点 着丝粒 20世纪70年代分离克隆出着丝粒DNA（CEN DNA)。 　　起着将染色体顶端“封口”、保持染色体结构稳定和维持其长度完整的作用。没有端粒的染色体末端为粘性末端，可与另一个染色体粘性末端相接。同一条染色体的两条染色单体的粘性末端也可以相互连接，产生双着丝粒染色体，出现“断裂—融合—染色体桥—断裂—融合”周期现象。 端粒 真核生物染色体的两个末端 真核生物染色体