当归挥发油对高血压模型大鼠血压与血管炎症反应影响.docVIP

当归挥发油对高血压模型大鼠血压及血管炎症反应的影响 　　摘要：目的 观察当归挥发油对高血压模型大鼠血压和相关炎症因子的影响，探讨其降压的作用机制。方法 采用N-硝基-L-精氨酸灌胃建立高血压大鼠模型。实验大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和当归挥发油高、低剂量组，每组5只。各给药组给予相应药物灌胃，连续8周。采用无创血压检测系统检测给药前后大鼠尾动脉收缩压；ELISA检测大鼠血清内皮素-1（ET-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、超敏C反应蛋白（CRP）水平；实时荧光定量PCR检测心脏组织CRP mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组收缩压、ET-1、VCAM-1、CRP水平及其mRNA表达明显升高（P75%），甘肃岷县康达药业开发有限责任公司，超临界CO2萃取，1%吐温-80助溶，加蒸馏水配成所需浓度；卡托普利片，上海旭东海普药业有限公司，批号141005；L-NNA，上海源叶生物有限公司，批号YY10014-100g。 　　1.3 主要试剂与仪器 ET-1、CRP、VCAM-1 ELISA试剂盒，上海源叶生物科技有限公司；Trizol RNA提取试剂，Invitrogen公司；Reverse Transcription System、qPCR Master Mix试剂盒，Promega公司；TMC203型BP-98A动物无创血压测定系统，日本东芝公司；多功能酶标仪，瑞士Tecan Infinite；超微量紫外可见分光光度计，美国Quawell；Sorvall Fresco低温高速离心机，美国索福公司；实时荧光定量PCR仪，美国BIO-RAD公司；JY600电泳仪，北京君意东方电子设备有限公司；Gel Doc XR+凝胶成像系统，美国BIO-RAD公司 2 实验方法 2.1 造模 30只雄性Wistar大鼠适应性饲养7 d，于第6日14：00测定收缩压，每只大鼠测量3次，取平均值。随机取5只大鼠作为正常对照组，其余25只大鼠第7日10：00每日灌胃L-NNA 490 mg/kg，连续28 d，于第7、14、21、28日14：00测量收缩压，每只大鼠测量3次，取平均值，以平均收缩压≥180 mm Hg为造模成功标准。停药后正常饲养5 d，14：00测定收缩压，每只大鼠测量3次，取其平均值，结果20只大鼠造模成功 2.2 分组及给药 造模前随机选取5只Wistar大鼠作为正常组；造模后将成模大鼠按体质量、收缩压分为模型组、阳性药组、当归挥发油高剂量组（中药高剂量组）、当归挥发油低剂量组（中药低剂量组），每组5只。阳性药组每日予卡托普利药液25 mg/kg灌胃，相当于临床成人日用量的10倍；中药高剂量组每日予含当归挥发油10%当归挥发油乳剂15 mL/kg灌胃，相当于成人日用当归原药材30 g的20倍；中药低剂量组每日予含当归挥发油5%当归挥发油乳剂15 mL/kg灌胃，相当于成人日用当归原药材30 g的10倍；模型组和正常组予等容量生理盐水灌胃。每日1次，连续8周 2.3 大鼠血压观察 用BP-98A动物无创血压测量系统测定安静状态下大鼠尾动脉收缩压，于给药第0、5、15、25、35、45、55、60日14：00测量血压，每只大鼠测量3次，取其平均值 2.4 标本采集 第61日乙醚麻醉大鼠，腹主动脉取血10 mL，静置30 min，4000 r/min离心10 min，分离血清；取心脏组织，液氮冷冻后置于-80 ℃冰箱保存备用 2.5 ELISA检测血清内皮素-1、血管细胞黏附分子-1、超敏C反应蛋白水平 按试剂盒说明设置标准品孔和样本孔，每组3个复孔，标准品稀释成5个梯度（浓度为0的标准品S0号视为空白孔），每孔50 μL；样本孔先加待测样本10 μL，后加样本稀释液40 μL；除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 μL，封板膜封住反应孔，37 ℃水浴60 min；弃液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；每孔加入底物A、B各50 μL，37 ℃避光孵育15 min；每孔加入终止液50 μL，15 min内，于450 nm波长处测定各孔OD值。以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，按曲线方程计算各样本浓度值，各样本浓度×5即为样本实际浓度 2.6 RT-PCR检测心脏组织超敏C反应蛋白基因表达 2.6.1 提取总RNA 称取心脏组织1.8 g，置于4 mL无酶EP管内，各加1.5 mL预冷PBS，用组织匀浆器匀浆；4 ℃、3000 r/min离心10 min，弃上清液；各加1 mL Trizol，混匀；转移到1.5 mL无菌管中，