质粒DNA提取及纯化.罗云鹏课件.ppt

提出问题及备注小结 1.用碱裂解方法制备质粒DNA过程中温度需要注意什么？ 2.为什么要严格控制碱变性时间？ 温度低于30摄氏度效果很好，如果室温高于30摄氏度，会增加切口环状DNA的量。在这种情况下，转染的效率会有所降低，但对限制酶切DNA，DNA探针制备和DNA重组没有什么影响。 长时间碱处理会使超螺旋DNA发生不可逆变性，由此产生的环状卷曲型DNA不能被限制酶切割，所以要严格控制碱变性时间。 3.从核酸溶液中去除蛋白质的标准方法是先用酚抽提，然后再用氯仿抽提 这一流程的原因是？ 使用两种不同的有机溶剂去除蛋白质，比单一一种有机溶剂效果好。 4.酚使用前必须进行平衡使其PH值 在7.8以上，如果酚未被平衡会怎样？ DNA将趋于被分配到有机相。 2016 课题小组 DNA的提取和纯化 小量制备 大量制备 碱裂解小量制备法 氯化铯/溴化乙锭平衡力新法 碱裂解法制备粗制裂解物 煮沸小量制备法 名词解释 1.质粒 质粒zhìlì（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构型，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。然而，1984年，在Streptomyces coelicoler（天蓝色链霉菌）等放线菌以及在Borrelia hermsii（赫氏蜱疏螺旋体）等原核生物中，又相继发现线形质粒。 2.基因工程 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。 它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。它克服了远缘杂交的不亲和障碍。 溶液一 50mmol/L葡萄糖 ，25mmol/L Tris-Cl 10mmol/LEDTA Tris-Cl Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，25℃），中文别名：三（羟甲基）氨基甲烷；氨丁三醇；缓血酸铵；三羟甲基氨基甲烷；Tris，英文名称：Tris(hydroxymethyl)aminomethane 分子式：C4H11NO3 分子量：121.14 CAS号：77-86-1 密度：1.353 熔点：167-172℃ 沸点：219-220℃ (10 mmHg) 闪点：100℃ 水溶性：550 g/L (25℃) 外观：白色结晶 水溶性：无色，澄清 毒性：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。 用途 Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一，其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。 作为蛋白缓冲液时，若后续工作需要质谱，则不适宜用Tris，最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。 苏宁易 用途 Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一，其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。 作为蛋白缓冲液时，若后续工作需要质谱，则不适宜用Tris，最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。 苏宁易购 宝宝知道 拇指医生 百度知道 首页 电脑版 反馈 词条由网民创作并享有版权，请保护版权归属 了解更多Tris-HCl 用百度知道 词条目录 百科名片 概述 简介 用途 EDTA溶液 乙二胺四乙酸能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的一种螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要Mg2+，故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂；也可用于去除重金属离子对酶的抑制作用。 用途 EDTA是一种重要的络合剂。EDTA用途很广，可用作彩色感光材料冲洗加工的漂白定影液，染色助剂，纤维处理助剂，化妆品添加剂，血液抗凝