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无菌试验检查方法 验证资料 文件编号： 文件起草 日期 文件审核 日期 文件批准 日期 公司 质控部：XX，负责验证方案的起草及组织实施； 质控部：XX，负责验证的操作执行。 质控部：XXX、XXX，负责检验的操作和复核。 5 文件准备和培训 5.1 检查验证所需的各类文件及记录资料，应齐全；相关的文件草案是否已具备。 5.2 组织 参加验证人员需进行本方案的学习。 6 验证条件及验证时间安排 6.1 验证条件 6.1.1 质控部检测的公用系统良好；仪表量器经过校验合格，且在有效期内。 6.1.2 供试品 至少6批 6.1.3 培养基及试剂： ①0.9%的氯化钠溶液 ②硫乙醇酸盐流体培养基 ③改良马丁培养基 ④改良马丁琼脂培养基 ⑤营养琼脂培养基 ⑥PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 ⑦营养肉汤培养基 6.1.4 验证用菌株： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501](Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]vJ/7H 6.1.5 1O%$|IO^ 无菌检验仪器及相关设备 压力蒸汽灭菌器 型号： 生产厂家： 校验日期： 有效期： 生化培养箱 型号： 生产厂家： 校验日期： 有效期： 电热培养箱 型号： 生产厂家： 校验日期： 有效期： 超净操作台 型号： 生产厂家： 校验日期： 有效期： 6.2 验证时间 质控部提起草验证方案，经批准后实施，整个验证活动按下面时间安排完成。 年 月 日 至 年 月 日。 7 验证依据 《中国药典》2010年版附录无菌检查法 kQ8;%fh( 。 验证内容 总则： A、对照组按照现有方法进行检测。 B、验证组按照中国药典2010版中无菌检查法进行检测。 C、将两组试验结果进行对比、分析和评价，并作出验证结论。 8.1.培养基无菌性检查 8.1.1.取每管装量不少于50ml的硫乙醇酸盐流体培养基5支、每管装量不少于50ml的改良马丁培养基5支，置规定温度下培养14天。 8.1.2应无菌生长。 8.2 试验菌液的制备 8.2.1 接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养琼脂培养基中,置30~35℃培养18~24小时，分别取上述培养物1ml加9ml 0.9％的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100 CFU的菌悬液。 =BtHT( xa ?8.2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至12ml硫乙醇酸盐流体培养基中,30～35℃培养18～24小时，取上述培养物1ml加9ml0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100 CFU的菌悬液。 ? ? ? IRynm YVa8.2.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁琼脂培养基中，置23~28℃培养24~48小时，取上述培养物1ml加9ml 0.9％的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数小于100CFU的菌悬液。 19B~5Vbfg ?8.3供试液的制备 ◆稀释剂：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取供试品置中，ml的量将供试品进行冲洗，振荡浸提1h，作为供试液。