生物技术实验讲义.doc

现代生物技术实验讲义 DNA重组技术与基因检测芯片技术 动物细胞培养及细胞活性检测技术发酵工程及技术引 言 随着生物技术的发展，生物工程的专业技术人员的需求更为迫切，特别是生物技术已经渗透到各个行业，并已蓬勃发展。生物技术的发展不但要有深厚的理论基础，而且要求专业技术人员具有较强的动手能力，因为该学科是一门实践性较强的科学。在培养生物技术专业学生时要特别注意学生实验能力的培养，尤其是专业基本操作。 本专业学生的实验课程已经包括生物化学实验、微生物实验、基因工程实验、细胞工程实验和发酵工程实验等课程实验。这些实验为培养学生的基础操作能力、提高学生的实际动手能力等奠定了良好的基础，但是这些实验都是单个的小实验，各个实验各自为一体，没有系统地相互关联，学生完成实验后没有一个完整的概念。 本实验以基因工程、细胞工程和发酵工程实验为基础，组成了生物工程中上游、中游和下游技术。其中每一个部分放弃了原来单独小实验的结构，而改为一个独立的大实验，增加了学生的设计性和主动性。这些实验既注重和加强了原来各自的实验内容，又注意到相互联系。 本讲义分为三个部分，第一部分“DNA重组技术与基因检测芯片技术”；第二部分“动物细胞培养及细胞活性检测技术发酵工程及技术第一部分DNA重组技术与基因检测芯片技术 黄 静 陆泉枝 编 目 录 ………………………………………………………………………………………………3 1.相关基础知识 ……………………………………………………………………………….…..4 1.1 DNA重组技术的基本原理………………...…………………………………………………4 1.2 基因芯片技术的基本原理…………………………………………………………………...6 2. 实验目的和要求 …………………………………………………………………………….…7 2.1 DNA重组技术实验目的和要求…………………………………………………………7 2.2 基因芯片技术实验目的和要求……………………………………………………………...7 3. 实验材料和仪器 …………………………………………………………………………….…8 3.1 实验材料 ………………………………………………………………………………….…8 3.2 主要仪器设备 …………………………………………………………………………….…8 3.3 实验器皿……………………………………………………………………………………...8 3.4 细菌培养基…………………………………………………………………………………...8 3.5 分子生物学试剂……………………………………………………………………………...8 3.6 SDS电泳试剂…………………………………………………………………………9 3.7 基因芯片试剂……………………………………………………………………………….10 4. 实验内容………………………………………………………………………….……………10 4.1 DNA重组技术实验内容 ………………………………………………………….………..10 4.2 基因芯片技术实验内容…………………………………………………………………11 5. 习题………………………………………………………………………………………….…12 6. 参考资源…………………………………………………………………………………….…12 6.1参考书目………………………………………………………………………………………12 6.2 参考产品目录………………………………………………………………………………...13 6.3 参考网站……………………………………………………………………………………...13 附录一 质粒DNA的提取………………………………………………………………………14 附录二 琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………….………….15 附录三 DNA的纯度、浓度的测定…………………………………………………………….17 附录四 DNA的酶切和连接（体外重组）…………………………………………………….18 附录五 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA分子的转化………………………………19 附录六 重组转化子DNA的鉴定（篮白斑筛选法）…………………………………………21 附录七 重组转化子DNA的鉴定（限制性内切酶分析法）…………………………………22 附录八 DNA的体外扩增（PCR技术）………………………………………………………23 附录九 SDS－PAGE电泳………………………………………………………………………25 附录十 毛囊中