解脂耶氏酵母URA3基因敲除.pdfVIP

第29卷第4期 食 品 与 生 物 技 术 学 报 Vol_29 No．4 2010年 7月 JournalofFoodScienceandBiotechnology Ju1． 2010 文章编号 ：1673～l689(2010)04—0624～05 解脂耶氏酵母URA3基因的敲除 冯春利 ， 任 清， 张蕾蕾， 李秀婷 ， 宋焕禄 (北京工商大学 化学与环境工程学院，北京 100048) 摘 要：构建 了营养缺陷型解脂耶氏酵母菌株 ，使之用于遗传标记和高产香味物质 癸 内酯。作 者利用基 因同源重组的方法敲除掉尿嘧啶合成酶关键基 因URA3基 因，用尿嘧啶营养缺 陷型培养 基 (SD-URA)添加一定浓度的5一氟乳清酸(5-FOA)和尿嘧啶筛选获得转化子。实验表 明：尿嘧啶 营养缺陷型菌株在含有5-FOA和尿嘧啶的培养基上生长而野生型菌株不生长 ，从而建立 了一种快 速获得营养缺陷型解脂耶 氏菌株的方法。 关键词 ：解脂耶氏酵母菌；URA3；基因敲除 中图分类号：Q 819 文献标识码 ：A TheDisruptionofURA3 GeneofYarrowia lipolytica FENG Chun—li， REN Qing， ZHANG Lei—lei， LIXiu—ting， SONG Huan—lu (CollegeofChemical＆ EnvironmentalEngineering，BeijingTechnology8LBusinessUniversity，Beijing100048，China) Abstract：Inordertogethigh—yield丫一decalactoneandgeneticmarkers，anauxotrophieYarrowia lipolytica strainwasisolatedbygeneticmodification．Inthisstudy，URA 3，akeygeneforuracil synthetaseofYarrowia lipolytica， was disrupted using the method of gene homologous recombination，thentransformantswerescreenedbyuracilauxotrophicmedium (SD-URA)with thecombinationof5-FOA anduracil．Theresultsshowedthattheuracilauxotrophicstrainwas abletogrow attheSD-URA medium containingS—FOA anduracilwhilethewild—typestrainsdo not grown． Therefore， an easy and efficient method for obtaining auxotrophic Yarrowia lipolytica strainwasestablishedinthisstudy． Keywords：Yarrowia lipolytica，URA3，genedisruption 解脂耶 氏酵母于 1942年首次被分离得到 ，先 酵母Yarrowialipolytica的发酵能力是较强的 。 后被命名为 Candidalipolytica、Endomycopsisli— 在 Yarrowialipolytica中，LIRA3l4 基 因能 polytica、Saccharomycopsislipolytica，最终定名为 够编码乳清苷酸脱羧酶基因，该酶是尿嘧啶合成的 Yarrowialipolytica(解脂耶氏酵母)[1j。解脂耶氏 关键酶。该酶又可催化 5～氟乳清酸 (5一F0A)[6转 酵母是非常规酵母 中的一种口]，非常适应疏水环 化为有毒物质。作者通过对 URA3