细胞培养的基本原理及技术第一章细胞培养的基本原理及.PDFVIP

细胞培养的基本原理与技术 第一章 细胞培养 的基本 原理 与 技术 现代 生物 技术一般认为包括 基因 工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而 这些技术的发展几乎都与 细胞培养 有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的 作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在 研究 生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程 乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为 载体 ；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单 克隆抗体 ，完全是 通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的 基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切 相关。总之，细胞培养在整个 生物技术 产业的发展中起到了很关键的核心作用。 第一节 体外培养的概念 一、基本概念 ●体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出， 放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。 ●组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。 ●细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。 ●器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外 进行培养的方法。 二、体内、外细胞的差异和分化 1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相 对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间 后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中 的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能， 也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内 不同。细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞） 在一定的因素作用下可以合成血红 蛋白 ，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状 结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。 第二节 细胞培养的一般过程 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节 的疏忽可导致 实验 失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基 与其 他 试剂 的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。 二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、 分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体 取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。 理论上讲各种 动物 和人体内的所有组织都可以用于培 养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高 的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时， 可将组织块切成黄豆般大的小块，置 4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避 免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素 处理。 三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块 接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接 入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加 入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。 正在培养中的细 胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养 基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度 也要定时检查。 原代培 养一般有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜 伏期后细胞进入旺盛的