【2017年整理】四水草脱毒苗.pptVIP

第四章 水草脱毒苗培育及种质资源的离体保存 ;第一节 水草脱毒苗培育; “脱毒苗” 是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。要脱除植株体内所有病毒包括未知病毒是不可能的。 脱苗可通过群体中未受病毒侵染的植株无性繁殖获得。由于病毒不经种子传播（豆科种子除外），因而也可通过种子繁殖获得无病毒植株。 ; （一）茎尖培养脱毒 （二）热处理脱毒 （三）热处理结合茎尖培养脱毒 （四）其他脱毒方法; 1、通过茎尖培养脱毒的原理 （1）病毒在植物体内的分布 茎尖、根尖分生组织不含病毒粒子或病毒浓度很低。是因为病毒在寄主植物体内随维管系统（筛管）转移．在根尖与茎尖分生组织中没有维管束系统，病毒运动困难。 病毒在寄主茎尖分生组织中的转移速度落后于茎（根）尖的生长速度，导致顶端分生组织附近病毒浓度低，培养便可获得无病毒再生植株。 ; （2）茎尖大小与脱毒效果 用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最大直径0.lmm；通常是带1～3个叶原基的茎尖（约0.3～0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒效果差。 ;; （3）剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。; （4）培养 接种后材料置 25?2℃，光照度 1500～5000lx，每日光照10～16h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比暗培养效果好。 培养两个月左右，大的茎尖再生出绿芽，小的（0.1～0.5mm）茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度，可形成大量丛生芽。; （5）生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖），再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。 ;;; 2．培养方式 茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养，但去掉琼脂的液体培养基效果（滤纸桥）更好。 ? ; ; 热处理方法 （1）温汤处理 将材料放置50℃左右热水中浸数分钟至几小时，可使病毒失活。此法简便易行，适于离体材料和休眠器官的处理，缺点是易伤害材料。; （2）热风处理 将盆栽植物移入室内或生长箱中，以35℃～40℃温度处理几十分钟至数月。按植物种类、器官类别和生理状况及待脱除病毒的种类等，确定处理温度与处理时间; ; 1、愈伤组织培养脱毒 2、珠心胚培养脱毒 3、微尖嫁接脱毒 4、花药培养脱毒 5、蒜薹圆盘培养脱毒 6、化学处理; 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 依据是愈伤组织细胞带病毒不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生出的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒浓度下降。甚至检测不出病毒。; 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织细胞发生了抗病毒突变。此外，在母株上也存在抗病毒的细胞，它们与感病毒的细胞并存，采用它们存在部位的组织离体培养，所获再生植株中有较高比例的无毒株。 马铃薯茎尖愈伤组织再生植株中，不含马铃薯X病毒（PVX）植株的频率高达46％，远高于茎尖直接成苗植株的频率。; 2、珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外，还