疾病基因克隆与基因诊断剖析.ppt

第十一章：疾病基因克隆与基因诊断 主讲内容 一：遗传标记 二：遗传作图 三：疾病基因鉴定 主要内容 一：遗传标记 二：遗传作图 三：疾病基因鉴定 1.形 态 标记： 是指那些能够明确显示遗传多态的外  观性状，如株高、粒色等的相对差异 2.细胞学标记 ：是指能够明确显示遗传多态的细胞学特征。 如染色体结构上和数量上的遗传多态性等。 3.蛋白质标记：非酶蛋白质和酶蛋白质 在非酶蛋白质中，用得较多的是种子贮藏蛋白； 酶蛋白质主要是同功酶。 4.DNA 标 记： 也称DNA多态性标记、 DNA分子标记， 是 DNA水平上遗传多态性的直接反映。 第一节、遗传标记 （Genetic marker) 遗传学中通常将可识别的等位基因称为遗传标记。 但随着遗传学和基因概念的发展其内涵也发展。 除基因标记外遗传标记主要包括： 这里仅介绍遗传的分子标记中的几种重要的分子标记: 1.同工酶标记: 同工酶（Isozyme）是一类分子结构不同、 功能相似、催化同样的生化反应的酶。 同工酶标记是利用编码同工酶的等位基因与同工酶酶谱的相关性及其共显性的特点进行染色体定位和遗传连锁分析。 2.DNA分子标记: (1)基于DNA-DNA杂交的DNA标记 RFLP标记 (restriction fragment length polymorphism)： DNA某一位点上的变异有可能引起该位点特异性的限制性内切酶识别位点的改变，包括原有位点的消失或出现新的酶切位点，致使酶切片段长度随之发生变化。这种变化引起的多态现象即为限制性片段长度多态性。 对RFLP的检测主要是用Southern杂交的方法进行，即利用限制酶酶解及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子，然后用经标记的特异DNA探针与之杂交，通过放射自显影或非同位素显色技术来揭示DNA的多态性。( 图 Southern ) 1 39 39 Recombinants ZCL ZZA 1 2 3 4 (A) (B) Fig.1 The southern analysis of RFLP marker RG214. 1 The polymorphism of RFLP marker RG214 between 2 parents and 2 bulks 9RFLP analysis of plants in F2 population with RG214 （2 ）基于PCR的DNA标记： ①RAPD（random amplified polymorphic DNA）标记： 随机引物PCR标记，随机扩增多态性DNA，用随机短引物（人工合成的十核苷酸）进行DNA的PCR扩增。所扩增的DNA区段是事先未知的，具有随机性和任意性，因此随机引物PCR标记技术可用于对任何未知基因组的研究。 ② ISSR (Inter-simple sequence repeats)标记:简单序列重复 区间扩增多态性。利用基因组中常出现的SSR本身设计引物，无需 预先克隆和测序。 ③SSR（simple sequence repeats)标记:简单重复序列多态 性。又称微卫星DNA多态性，即由二核苷酸，三核苷酸或四核苷酸 串联重复的拷贝数目不等而出现的多态现象。 ④ STS（sequence-tagged site）标记:序列标定位置。 染色体上位置已定的、核苷酸序列已知的、且在基因组 中只有一份拷贝的DNA短片断，一般长200－500bp。STS 标记是根据单拷贝的DNA片断两端的序列，设计一对特异 引物，经PCR扩增基因组DNA而产生的一段长度为几百bp 的特异序列。 （3）基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记 ①AFLP（amplified fragments length polymorphism） 标记:扩增片段长度多态