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上海交通大学医学院硕士论文 胰腺癌耐药机制初步探讨 摘要 胰腺癌是消化系统恶性程度高的肿瘤之一，预后极差。吉西他滨是胰腺癌 化疗的一线药物，但是由于胰腺癌对吉西他滨存在先天性及获得性耐药，所以它 效果不是很明显。双功能基因脱嘌呤/ 脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease/ redox effector factor-1, APE1/Ref-1)基因具有核酸内切酶和氧化还 原两种功能，它不仅能够通过氧化还原功能去调控多种肿瘤相关的转录因子活性， 而且是DNA损伤修复过程中的关键酶。 【目的】 1. 建立胰腺癌耐药细胞株，了解耐药细胞株形态及特性变化，并初步探讨胰腺 癌耐药机制； 2. 探讨 APE1/Ref-1 表达与胰腺癌耐药机制关系。 【方法】 通过在体外对胰腺癌细胞株 SW1990 进行连续药物（吉西他滨）刺激，形成 对一定浓度吉西他滨耐药的耐药细胞株 （SW1990-0.5 ）；光学显微镜 （100×）观 察 SW1990-0.5 形态变化；CCK-8 试验计算 SW1990-0.5 细胞的耐药指数；细胞 群体倍增时间试验、划痕试验、单细胞凝胶电泳试验、流式细胞术比较SW1990 与 SW1990-0.5 细胞在体外增殖、侵袭、DNA 损伤、细胞周期及凋亡变化；RT-PCR 技术比较多药耐药相关基因、吉西他滨代谢相关酶基因及 APE1/Ref-1 mRNA 表 达变化；western blotting 技术比较APE1/Ref-1 蛋白表达变化。 【结果】 1. SW1990-0.5 的耐药指数为 （9.43±1.91 ）；耐药细胞株在形态上没有显著改 变；对于耐药细胞株特性方面，在体外耐药细胞株生长变慢，侵袭能力以及 细胞周期并没有显著改变，但是细胞凋亡比例明显减少，并且细胞 DNA 损 伤减少； 2. 与亲本细胞比较，在 RNA 水平上，耐药细胞株 MRP-1，BRCP 及 dCK 表达 I 上海交通大学医学院硕士论文 减少，MDR-1，RRM1 及 RRM2 表达没有显著变化； 3. 与亲本细胞比较，耐药细胞株 APE1/Ref-1 mRNA 及蛋白表达增加。 【结论】 1. 成功建立了稳定胰腺癌耐药细胞株 SW1990-0.5 ； 2. 胰腺癌耐药可能与凋亡减少、DNA 损伤减少与 dCK 表达减少有关； 3. APE1/Ref-1 表达增加可能会增加胰腺癌耐药性，并可能是通过促进 DNA 损 伤修复来增加耐药。 关键词：胰腺癌；吉西他滨；耐药；APE1/Ref-1；DNA 损伤修复；dCK II 上海交通大学医学院硕士论文 A preliminary study on the mechanism of Gemcitabine-resistance of pancreatic cancer in vitro Abstract Pancreatic cancer is one of the malignant tumors in the digestive system with extremely poor prognosis. Gemcitabine is as the first-line drug to treat advanced pancreatic cancer patients. However, the clinical effects of Gemcitabine remain modest, because of a high degree of inherent and acquired chemo-resistance to pancreatic cancer. T