中黑盲蝽丝氨酸蛋白酶基因克隆及序列探析.doc

中黑盲蝽丝氨酸蛋白酶基因克隆及序列探析 　　摘要：采用兼并引物和RACE的技术，在中黑盲蝽（Adelphocoris suturalis Jakovlev）中获得丝氨酸蛋白酶的全长cDNA序列，将该基因命名为ASJSP，cDNA全长为958 bp，开放阅读框为885 bp，推测编码295个氨基酸，预计分子量为31.20 kDa，等电点pI为9.38，预测分子式为C1 374H2 222N390O407S15，不稳定系数为31.94，总亲水性系数为0.114，为疏水性稳定蛋白质。序列分析表明ASJSP与其他盲蝽科昆虫已知丝氨酸蛋白酶的核苷酸序列一致性为55.70% 关键词：中黑盲蝽（Adelphocoris suturalis Jakovlev）；丝氨酸蛋白酶；RT-PCR；序列分析 中图分类号：S433.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）21-5659-05 DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.21.056 Cloning and Sequence Analysis of Serine Proteinase of Adelphocoris suturalis Jakovlev LIU Qiao-ying， LI Meng-ge， LIU Xue-fei， YU Hao， WANG Yun-bing （School of Resourse and Environment Science，Henan Institute of Science and Techology，Xinxiang 453003，Henan，China） Abstract： RT-PCR with degenerate primers and RACE were used to amplify partial cDNA fragments and full cDNA，one serine protease gene from Adelphocoris suturalis Jakovlev was identified， designated ASJSP. The full-length cDNAs of ASJSP is 958 bp，this gene contains 885 bp open-reading frames（ORF） which encodes a putative 295 amino acid protein，with a predicted molecular mass of 31.20 kDa and isoeletric point（pI） of 9.38. Its predicted molecular formula is C1 374H2 222N390O407S15. Bioinformatical analysis showed that it is a instability index is 31.94 and the GRAVY 0.114，suggesting that it is a stable hydrophobic protein. Sequences analysis showed that ASJSP had 55.70% identity with complete serine protease genes from other Miridae insects. Key words：Adelphocoris suturalis Jakovlev；serine proteinase；RT-PCR；sequence analysis ?z氨酸蛋白酶主要消化昆虫食物中的蛋白质类营养物质，并参与合成与降解昆虫体内的蛋白质，是大多数昆虫消化系统内较为重要的消化酶，其主要包含弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶等[1-5]。目前，已有一些关于半翅目盲蝽科昆虫的丝氨酸蛋白酶方面报道，研究发现Lygus rugulipennis和Creontiades dilutus等盲蝽科昆虫唾液中富含胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶类[6-9]，豆荚盲蝽Lygus Hesperus唾液腺内的总蛋白酶活性也以胰蛋白酶活性为主[10-12]。Zhu等[13]发现美国牧草盲蝽取食后，主要依靠其唾液腺内的丝氨酸蛋白酶先进行初步消化，之后其他肠道内的蛋白酶进一步消化，吸收蛋白质类营养物质，且丝氨酸蛋白酶的活性占其唾液腺内总蛋白酶活性的80%。以上研究结果说明，在半翅目昆虫消化系统内丝氨酸蛋白酶是较重要的消化酶 中黑盲蝽（Adelphocoris suturalis Jakovlev）为半翅目盲蝽科昆虫，是中国一种重要的盲蝽类害虫，广泛分