细胞生物学实验报告 染色体的观察 山东大学.docVIP

一、实验名称 染色体的制备观察、实验目的 3、学习染色体的染色和观察过程。 1、染色体 细胞分裂观察 的有丝分裂可以大体分为五个阶段：前期、前中期、中期、后期、末期每一个时期都有特定的形态和行为特征。： 前中期：核膜崩解；纺锤体完成装配，前期星体的形成和向两极的运动标志着纺锤体组装的开始。随着核膜的解体，由纺锤体两极发出的一些星体微管可进入“核”内，通过其正极端捕获染色体，形成动粒微管。至此，纺锤体基本完成组装；染色体整列，在动粒微管的作用下，染色体列队到赤道板。 中期：也是该的重点观察时期。 ： 末期：睾丸 4、倒置染色法 在玻璃板上用废旧玻璃板作支架，使得标本载玻片的正面朝下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液，这样，一可以节省染料，二可以防止染料快速挥发，三可以防止染色颗粒沉淀影响观察。在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要有间隙。滴染液时应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不着色，影响观察。 三、实验材料 1、材料 6~8周龄，20~30g的雄性小鼠 2、试剂 （1）0.85%氯化钠溶液 （2）0.02%秋水仙素溶液，4℃保存 （3）0.4%KCl溶液 （4）卡诺氏固定液 无水乙醇：无水乙酸=3:1 （5）1/15 mol/L的磷酸缓冲液（pH=6.8） （6）Giemsa 染液 3、器材 离心机、镊子、解剖盘、载玻片、玻璃板、小烧杯、普通光学显微镜、解剖剪、铜网、滴管、离心管等。 四、实验步骤 染色体标本的制备： 1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。 2、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎，至溶液呈乳白色，使细胞分散。用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。 3、37℃静置30分钟，进行低渗处理。（整个过程控制在50分钟内）1000 r/min 离心8分钟。弃上清液，加入2ml甲醇?冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。 4、再以800～1000 r/min离心8分钟。弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。 5、取洁净的低温预冷载玻片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液（使细胞分散），从载玻片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 6、将玻片放置在标本盒中空气干燥。 染色体标本的观察： 1、染色：倒置染色法用 Giemsa液染色20 ～ 30分钟，细水冲洗玻片背面，擦去多余染液，干燥。 2、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的位于分裂中期的分裂相，高倍镜下观察染色体形态并计数。 五、实验结果 3138个40个 40个 六、结果分析 ，结果极为模糊，较为失败。 在自己中，没有明显的呈现出“V”或“U”染色体集合的蓝色背景上的染色体，大多数细胞已经成为碎片： 速度过快，导致细胞紧密的黏在一起，很难吹散。 吹散细胞的过程中，力度太大，导致细胞破裂，染色体流出。 在摔碎细胞时，滴加高度太小，细胞没有摔碎。 在桌面上敲打细胞，力度太小，仍有细胞没有破裂。 2在观察师兄师姐的装片时，发现有的染色体数目多于有的少于分析其原因可能是： 染色体数目多于 不同的细胞具体太近，染色体混合，导致数目过多； 分布太密集，染色体与其他细胞的染色体上下重合，在显微镜下无法分辨清晰；染色体数目于 吹打过程中，细胞轻微破裂，部分染色体流失； 过程中，细胞也有可能发生部分染色体被摔离现象； 倒置染色、清洗染液的过程中，部分染色体被洗掉； 过程中，有的染色体没有着色，无法观察到。、 1、自加入0.3%KCl始，至离心，整个过程应注意控制时间，尽量保持在45-50min之内。低渗处理是为了使细胞变大易于观察，但低渗时间过长会使细胞破裂。 2、破碎睾丸时，可先加入少量KCl，方便剪碎。破碎差不多后再加入剩下的KCl，先加入的KCL量一定要少，否则不易剪碎。 3、操作过程中应注意动作不可过大，因为低渗处理的细胞体积变大，更易破碎。 4、滴片前应尽量轻轻混匀悬液，使细胞分开。 5、滴片时，应保证玻片在低温状态下。 6、采用倒置染色法，可以防止染液蒸发，同时使染色更加均匀。 八、讨论 的目的是什么？ （2）使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态； （3）使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定； （4）使不同组织成分对燃料有不同的亲和力。便于染色； （5）防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。 2、秋水仙素抑制细胞分裂的原理是什么？ 使用秋水仙素后，纺锤丝的合成被抑制，尤其是动粒