蛋白质的生物合成-翻译.ppt

蛋白质的生物合成  —翻译 一， 蛋白质生物合成的概述 需要掌握的几个要点： 1，翻译：以mRNA为模板，按照mRNA分子上的三个核苷酸决定一种氨基酸的规则（三联体密码）合成具有特定氨基酸顺序的蛋白质。包括翻译的起始、肽链的延伸、肽链的终止与释放。 2，核糖体是蛋白质合成的场所，mRNA是蛋白质合成的模板，转移RNA（tRNA）是模板与氨基酸之间的接合体。 此外，在合成的各个阶段还有许多蛋白质、酶和其他生物大分子参与。 二、蛋白质合成的分子基础 翻译（蛋白质的生物合成）: 以氨基酸为原料 以mRNA为模板 以tRNA为运载工具 以核糖体为合成场所 需Mg2+和适当缓冲体系 起始、延长、终止各阶段蛋白因子参与 合成后加工成为有活性蛋白质 核糖体结合技术 体外翻译系统的建立 核酸的人工合成 核糖体结合技术 Nirenberg与其他科学家合作，发现3个核苷酸为一个密码子并决定一个氨基酸的翻译。 Khorana发明了一种利用重复序列按设计需要连接任意核苷酸的方法，他发现ACACACACACACAC链合成的是Thr-His-Thr-His（苏氨酸-组氨酸-苏氨酸－组氨酸）链，证明ACA是决定苏氨酸的密码子，CAC是决定组氨酸的密码子等。 到1966年，Nirenberg和Khorana等人完成了对全部遗传密码的破译。1968年 Nobel Prize 在全部64个密码子中，61个密码子负责20种氨基酸的翻译，1个是起始密码子， 3个是终止密码子。 * 遗传密码的基本特点 方向性:肽链合成N端 C端,连续阅读从mRNA5’ 3’ 简并性: 同义密码子 偏爱密码（codon bias) 一个AA有多个密码子 如：CCA CCT CCG CCC 都代表Pro,人类基因CCA CCT 或 CCC，而大肠杆菌选择CCG 通用性与例外: 从最简单的生物（病毒）到人类，近乎使用同一套遗传密码 读码的连续性：密码是无标点符号的且相邻密码子互不重叠 起始密码和终止密码: 兼职性 AUG： 起始信号 Met的密码子 终止密码子不编码任何氨基酸称为无意义密码子 变偶性（Wobble）：密码上第一、二位上碱基不变，第三位碱基可改变 (二) tRNA转运活化的氨基酸至mRNA模板上 ? tRNA的L形三级结构 酵母和大肠杆菌tRNA的三级结构都呈L形折叠式。这种结构是靠氢键来维持的，tRNA的三级结构与AA- tRNA合成酶的识别有关。 tRNA的功能 1）识别mRNA链上的密码子 2）携带活化的氨基酸到生长肽链的正确位置，起转移氨基酸作用。 氨基酸在合成蛋白质之前必须通过AA-tRNA合成酶活化，在消耗ATP的情况下结合到tRNA上，生成有蛋白质合成活性的AA-tRNA。 该实验说明什么问题 将 [14C]-Cys-tRNACys，经Ni催化生成[14C]-Ala-tRNACys，再把[14C]-Ala-tRNACys加进含血红蛋白mRNA的兔网织细胞核糖体的蛋白质合成系统中，结果发现[14C]-Ala-tRNACys插入了血红蛋白分子通常由半胱氨酸占据的位置上 （三）tRNA的种类 （1）起始tRNA和延伸tRNA 能特异地识别mRNA模板上起始密码子的tRNA叫起始tRNA，其他tRNA统称为延伸tRNA。原核生物起始tRNA携带甲酰甲硫氨酸（fMet），真核生物起始tRNA携带甲硫氨酸（Met）。 （2）同工tRNA 代表同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA，同工tRNA既要有不同的反密码子以识别该氨基酸的各种同义密码，又要有某种结构上的共同性，能被AA- tRNA合成酶识别。 （3）校正tRNA： 分为无义突变及错义突变校正tRNA 。 A. 无义突变 在蛋白质的结构基因中，一个核苷酸的改变可能使代表某个氨基酸的密码子变成终止密码子（UAG、UGA、UAA），使蛋白质合成提前终止，合成无功能的或无意义的多肽，这种突变就称为无义突变。 无义突变的校正基因tRNA不仅能校正无义突变，也会抑制该基因3‘ 末端正常的终止密码子，导致翻译过程的通读，合成更长的蛋白质，这种蛋白质过多就会对细胞造成伤害。 同样，一个基因错义突变的矫正也可能使另一个基因错误翻译，因为如果一个校正基因在突变位点通过取代一种氨基酸的方式校正了一个突变，它也可以在另一位点这样做，从而在正常位点上引入新的氨基酸。 （四） 肽链合成的“装配机”---核糖体 核糖核蛋白的结构 核糖核蛋白的种类 (胞质中) 由大小二亚基组成 给位（P位，肽位）： 起始时，