2.2.2 动物细胞融合和单克隆抗体.pptVIP

3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 1.第一次筛选： 在“选择培养基”上培养筛选杂交瘤细胞（多种）。 2.第二次筛选： 筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 单克隆抗体： 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） * 一、动物细胞融合 1. 基本原理 3 . 与植物体细胞杂交技术有何不同？ 2.诱导融合的常用方法 4.动物细胞融合后能形成杂种动物个 体吗？ 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 用 途 诱 导 方 法 融合前处理 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 抗体是由何种细胞产生的？ 2. 抗体是如何产生的？ 二、单克隆抗体的制备 特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏 常规抗体制备 一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 单克隆抗体 杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖 融合 单克隆抗体 培养 优点：特异性强，灵敏度高。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 能产生特定抗体杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 1）本过程利用了哪些原理和技术？ 免疫原理，细胞融合技术和动物细胞培养 2）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 3）注射抗原的目的是什么？ 4）诱导其融合的方法有哪些？ 5）为何要进行两次筛选？ 单克隆确有单个细胞克隆的含义，克隆的是杂交瘤细胞。 2、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 3、单克隆抗体的应用 *