2006年秋冬季青岛地区婴幼儿病毒性腹泻病原分析论文.docVIP

　　2006年秋冬季青岛地区婴幼儿病毒性腹泻病原分析论文 【摘要】 目的 了解青岛地区引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原组成及其流行情况。方法 2006年9~12月，采集青岛市儿童医院婴幼儿病毒性腹泻大便样品共38份，采用胶体金法检测轮状病毒；采用RT-PCR法检测星状病毒和人杯状病毒。结果 在38份样品中检测到轮状病毒7份，阳性率为18.42%；检测到星状病毒4份，阳性率为10.53%； 检测到人杯状病毒6份，阳性率为15.79%。其中1份混合感染星状病毒和人杯状病毒，1份混合感染轮状病毒和星状病毒，未发现轮状病毒和人杯状病毒的混合感染。结论 2006年秋冬季.freelain pathogens and the epidemic of viral diarrhea in infants in Qingdao. Methods Thirty-eight stool samples diarrhea patients attending Qingdao children’s hospital during Sep. to Dec. of 2006. Rotavirus ethod. Astrovirus and Calicivirus ong the 38 specimens, seven ple had mixed infection of Astrovirus and Calicivirus; one’s had mixed infection ain viruses involved in viral diarrhea during autumn and in离心10 min，取上清200 μL进行核酸提取，提取试剂盒采用美国Roche公司生产的High Pure Viral RNA Kit，按试剂盒使用说明书提取病毒RNA。 1.2.3 轮状病毒检测方法 采用胶体金法进行检测，试剂盒由北京万泰生物药业有限公司生产，批号操作按试剂盒说明书进行。 1.2.4 星状病毒检测方法 RT-PCR采用日本TaKaRa公司的One step RNA PCR kit (AMV)，反应体系为10×Buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl2 10 μL，10 mmol/L dNTPs 5 μL，4×107 U/L Rnase Inhibitor 1 μL，5×106 U/L AMV-Optimized Taq 1 μL，5×106 U/L AMV Reverse Transcriptase XL 1 μL，Mon269和1 μL，Mon270各1 μL，引物反应浓度为0.2 g/L,模板1 μL，补加水到50 μL。RT-PCR条件为42 ℃ 30 min，94 ℃ 2 min，94 ℃ 30 s, 56 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min，35个循环后72 ℃延伸10 min。取扩增产物6 μL点样于20 g/L琼脂糖凝胶上，电泳20 min，用凝胶成像仪观察电泳结果，观察是否有预期分子质量的条带出现。 1.2.5 人杯状病毒检测方法 病毒RNA提取方法同上。RT-PCR检测采用日本TaKaRa公司的One step RNA PCR kit (AMV)，反转录反应体系为10×Buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl2 4 μL，10 mmol/L dNTPs 5 μL，0.2 g/L 289引物1 μL，5×106U/L AMV Reverse Transcriptase XL 0.35 μL，4×107 U/L Rnase Inhibitor 0.1 μL，RNA模板1.5 μL，补加水到25 μL，反应条件为42 ℃1 h。PCR反应体系为10×Buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl2 4 μL，10 mmol/L dNTPs 1 μL，0.2 g/L 289引物1 μL，0.1 g/L 290引物1 μL，5×106 U/L AMV-Optimized Taq酶0.4 μL，cDNA 8 μL，补加水到50 μL；反应条件为94 ℃ 3 min；94 ℃ 60 s, 58 ℃ 80 s,.freelin，共30个循环；然后72 ℃延伸10 min。电泳实验同星状病毒检测方法。 2 结 果 2.1 轮状病毒检测 在38份粪便标本中，检测到阳性样本7份，阳性率为18.42%。 2.2 星状病毒检测 在38份粪便标本中，检测到阳性样本4份，阳性率为10.53%（图1）。 2.3 人杯状病毒检测 在38份粪便标本中，检测到阳性样本6份，阳性率为15.79%（图2）。本次实验用289、290简并引物针对RNA多聚酶编码区进行RT-PCR，诺如