HPLC法测定消妇炎胶囊中没食子酸的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定消妇炎胶囊中没食子酸的含量论文 邱洪张天监李新顺王利平 【摘要】目的建立高效液相色谱法测定消妇炎胶囊中主要成分没食子酸的含量。方法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.04%磷酸溶液（4：96）作为流动相；检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。结果没食子酸检测浓度线性范围为0.031～0.248μg（r=0.9999）；回收率为98.15%,RSD=1.1%(n=6)。结论本方法灵敏、准确、专属性强，可用于消妇炎胶囊中主要成分没食子酸含量的测定。 【关键词】HPLC消妇炎胶囊没食子酸 消妇炎胶囊处方来源于贵州省少数民族民间验方。处方由头花蓼、地稔、黄柏、延胡索、当归、五指毛桃、益母草七味药组成，具有清热解毒，除湿止带，行气止痛的功效，民间用于妇女带下等症1。本品中主药地稔和头花蓼均含有没食子酸.freel，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。 2.2 系统适用性试验分别取没食子酸对照品溶液、供试品溶液及缺地稔和头花蓼的双阴性对照溶液各10 l注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可知，在此色谱条件下，没食子酸峰与其他组分峰分离完全，在与没食子酸峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰（如图1、2、3）。 图1：没食子酸对照品 图2：供试品溶液 图3：双阴性对照溶液 2.3供试品溶液的制备 取装量差异项下本品内容物0.4g，精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。 2.4线性关系考察精密称取没食子酸对照品15.50mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得0.0124mg/ml的没食子酸对照品溶液，分别精密吸取没食子酸对照品溶液2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，测定结果见表5-23，并以对照品进样量X（μg）为横坐标，峰面积值Y(mv.s)为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，没食子酸在0.031～0.248μg范围内线性关系良好。 2.5精密度试验精密吸取对照品溶液10 l（浓度为0.0124mg/ml），重复进样6次，测定没食子酸峰面积积分值，求出峰面积平均值为211024，RSD=0.61%,结果表明精密度良好。 2.6稳定性试验取一供试品（批号，按2.3项供试品溶液的制备方法制备供试液。在室温下每隔一段时间进样10 l，测定没食子酸峰面积值，求出峰面积平均值为189691,RSD=0.43%,结果表明，没食子酸在12小时内基本稳定。 2.7重复性试验精密取本品（批号各0.4g，共6份，照前述供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液。精密吸取供试品溶液各10 l，测定没食子酸峰面积积分值，计算平均含量为1.248（mg/g），RSD=1.04%，结果表明，重复性良好。 2.8 中间精密度取同一批样品（批号，分两组由不同操作人员在不同设备(A组:LC-2010A高效液相色谱仪；B组：SSI高效液相色谱仪)上对本品进行含量测定，两组结果平均值为1.20mg/g,结果表明，中间精密度良好（RSD=0.16%）。 2.9 回收率试验采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品（批号6份，精密称取各约0.25g，精密加入没食子酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10 l，照上述色谱条件测定，记录色谱图，计算含量，结果表明，没食子酸的回收率良好，结果见表1。 表1加样回收试验结果 2.10样品测定取3批中试样品20080802按2.3项下方法制备供试品溶液,精密吸取20μl进样分析,记录色谱图；另按2.2项下方法制备对照品溶液,同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量，结果见表2。按下式计算含量： 3讨论 3.1供试品溶液制备中提取方法选择 方法1：取本品内容物，置回流瓶中，以4mol/L盐酸溶液为提取溶剂，以回流提取为处理方法，考察了不同提取时间内容物没食子酸含量。结果见表3。 试验结果表明，本品采用50%甲醇超声提取效率高、耗时短、操作简便，且供试品溶液不含酸，能有效保护色谱柱，可采用其为本品供试品处理方法，根据不同提取时间考察结果，确定超声时间为45分钟。 3.2供试品溶液制备中提取溶剂比较 取本品内容物，分别以水、甲醇和乙醇50ml，超声提取30分钟，过滤，滤液经微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，测定没食子酸含量，结果溶剂水和甲醇的提取效率相当，而乙醇的提取效率较低，由于以水为溶剂制备的供