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MMP2、TIMP2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义论文.doc
MMP2、TIMP2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义论文
【摘要】 目的 建立裸鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜及正常内膜的表达,探讨其在EMs发生、发展中的作用。方法 将育龄妇女正常分泌晚期子宫内膜注入裸鼠盆腹腔,建立EMs裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,并采用免疫组化方法(PV6001/6002法)检测异位内膜MMP2、TIMP2、VEGF蛋白表达水平,与种植前子宫内膜比较。结果 光镜下观察,异位病灶具有增生期特点;且异位内膜较正常内膜MMP2/TIMP2比值增高(t=12.919,P 0.01),VEGF蛋白表达增强(t=2.647,P 0.05)。结论 裸鼠模型是EMs早期临床研究的理想模型;MMP2/TIMP2比值升高及VEGF表达增强与异位内膜的高侵袭性和高血管新生能力有关.freelodel of nude mouse endometriosis, to detect the expression of matrix metalloproteinase 2 (MMP2), tissue inhibitor of metalloproteinase 2 (TIMP2) and vascular endothelial groetrial tissues and discuss the role of them in the pathogenesis of endometriosis. MethodsThe model etrial chipping at late secretory satge of childbearing age an into the peritoneal cavity of experimental animals killed at 18 d after the injection. The expressions of MMP2, TIMP2 and VEGF in the grafts munohistochemical method. ResultsThe characteristics of proliferative stage etrial MMP2/TIMP2 ouse model is an ideal model for the study of early phase of endometriosis. The increase of MMP2/TIMP2 ratio and VEGF expression are related to high invasion and angiogenesis of endometriosis, portant role in the occurrence and development of the disease.
[KEY A)单克隆抗体、兔抗人MMP2多克隆抗体、鼠抗人TIMP2单克隆抗体及兔抗人VEGF单克隆抗体均购自北京中杉公司。3 μm 厚连续切片,一张行苏木精伊红染色,余者采用PV6001/6002二步法行免疫组化染色,染色步骤按说明进行。免疫组化结果用自动图像分析软件进行分析,每张切片保持光线强度不变,随机选择3个视野(400倍)输入计算机进行分析,以平均吸光度值作为MMP2、TIMP2、VEGF的表达强度。
1.5 统计学方法
采用SPSS 10.0统计软件,对资料进行t检验。
2 结 果
2.1 形态学观察
本文30只裸鼠接种内膜, 其中23只发现种植内膜成活,成功率为76.7%。大体观察可见种植物(0.29±0.10) cm与裸鼠组织呈融合状态,表面有小血管爬行。种植主要发生在盆腹腔的腹壁、肠系膜、肠管和肝表面,腹壁、肠管与网膜的脂肪组织间可有粘连带。
2.2 组织学观察
镜下种植物呈增生期表现,立方状或扁平的腺上皮细胞围成圆形或椭圆形腺腔,周围是有大量炎细胞浸润的间质成分,间质无蜕膜化;种植灶边缘结缔组织增生,可见玻璃样变性;异位内膜同裸鼠组织交界处有丰富的新生毛细血管网。
2.3 免疫组化分析
2.3.1 EMA的表达 抗人EMA抗体可与人源组织中的上皮细胞特异结合,而与啮齿类动物上皮组织无交叉反应。本实验中,种植物腺上皮细胞呈棕黄色阳性表达,而裸鼠组织阴性表达。
2.3.2 MMP2、TIMP2的表达 MMP2、TIMP2为胞浆阳性表达,表达于正常及异位内膜的腺体和间质,以腺体表达明显。异位内膜中可见MMP2蛋白呈棕黄色阳性表达,而TIMP2为弱阳性或阴性表达。
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