MMP2、TIMP2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义论文.docVIP

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MMP2、TIMP2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义论文.doc

  MMP2、TIMP2及VEGF蛋白在子宫内膜异位症裸鼠模型组织中的表达及意义论文 【摘要】 目的 建立裸鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜及正常内膜的表达,探讨其在EMs发生、发展中的作用。方法 将育龄妇女正常分泌晚期子宫内膜注入裸鼠盆腹腔,建立EMs裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,并采用免疫组化方法(PV6001/6002法)检测异位内膜MMP2、TIMP2、VEGF蛋白表达水平,与种植前子宫内膜比较。结果 光镜下观察,异位病灶具有增生期特点;且异位内膜较正常内膜MMP2/TIMP2比值增高(t=12.919,P 0.01),VEGF蛋白表达增强(t=2.647,P 0.05)。结论 裸鼠模型是EMs早期临床研究的理想模型;MMP2/TIMP2比值升高及VEGF表达增强与异位内膜的高侵袭性和高血管新生能力有关.freelodel of nude mouse endometriosis, to detect the expression of matrix metalloproteinase 2 (MMP2), tissue inhibitor of metalloproteinase 2 (TIMP2) and vascular endothelial groetrial tissues and discuss the role of them in the pathogenesis of endometriosis. MethodsThe model etrial chipping at late secretory satge of childbearing age an into the peritoneal cavity of experimental animals killed at 18 d after the injection. The expressions of MMP2, TIMP2 and VEGF in the grafts munohistochemical method. ResultsThe characteristics of proliferative stage etrial MMP2/TIMP2 ouse model is an ideal model for the study of early phase of endometriosis. The increase of MMP2/TIMP2 ratio and VEGF expression are related to high invasion and angiogenesis of endometriosis, portant role in the occurrence and development of the disease. [KEY A)单克隆抗体、兔抗人MMP2多克隆抗体、鼠抗人TIMP2单克隆抗体及兔抗人VEGF单克隆抗体均购自北京中杉公司。3 μm 厚连续切片,一张行苏木精伊红染色,余者采用PV6001/6002二步法行免疫组化染色,染色步骤按说明进行。免疫组化结果用自动图像分析软件进行分析,每张切片保持光线强度不变,随机选择3个视野(400倍)输入计算机进行分析,以平均吸光度值作为MMP2、TIMP2、VEGF的表达强度。 1.5 统计学方法 采用SPSS 10.0统计软件,对资料进行t检验。 2 结 果 2.1 形态学观察 本文30只裸鼠接种内膜, 其中23只发现种植内膜成活,成功率为76.7%。大体观察可见种植物(0.29±0.10) cm与裸鼠组织呈融合状态,表面有小血管爬行。种植主要发生在盆腹腔的腹壁、肠系膜、肠管和肝表面,腹壁、肠管与网膜的脂肪组织间可有粘连带。 2.2 组织学观察 镜下种植物呈增生期表现,立方状或扁平的腺上皮细胞围成圆形或椭圆形腺腔,周围是有大量炎细胞浸润的间质成分,间质无蜕膜化;种植灶边缘结缔组织增生,可见玻璃样变性;异位内膜同裸鼠组织交界处有丰富的新生毛细血管网。 2.3 免疫组化分析 2.3.1 EMA的表达 抗人EMA抗体可与人源组织中的上皮细胞特异结合,而与啮齿类动物上皮组织无交叉反应。本实验中,种植物腺上皮细胞呈棕黄色阳性表达,而裸鼠组织阴性表达。 2.3.2 MMP2、TIMP2的表达 MMP2、TIMP2为胞浆阳性表达,表达于正常及异位内膜的腺体和间质,以腺体表达明显。异位内膜中可见MMP2蛋白呈棕黄色阳性表达,而TIMP2为弱阳性或阴性表达。

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