PPARγ在胃癌的表达及曲格列酮对胃癌SGC7901细胞生长的影响论文.docVIP

　　PPARγ在胃癌的表达及曲格列酮对胃癌SGC7901细胞生长的影响论文 崔涛，刘莹，朱祖安，刘霞 【摘要】 目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）在胃癌及癌前病变中的表达，研究PPARγ激动剂曲格列酮（troglitazone,TGZ）对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用及其作用机制。方法 免疫组织化学方法检测PPARγ在胃癌及癌前病变中的表达；体外培养SGC7901细胞给予TGZ干预，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术、苏木精-伊红染色、免疫细胞化学方法、SO液体配成浓度100 mmol/L，-20℃保存备用。TGZ作用浓度分为6组：0、6.25、12.5、25、50、100 μmol/L共6个剂量组。四唑蓝比色试验按照上述分组进行，根据MTT结果挑选出第1、4、5组进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、TT法） 取SGC7901细胞1×108/L接种于96孔培养板,每孔200 μl，置37℃、5%CO2及饱和湿度条件下待24 h细胞贴壁生长后，弃上清，按照上述实验分组设计分别加入含有TGZ的培养液，每组设6个复孔，重复2板，分别培养至48 h、72 h，弃上清，每孔加入5 g/L MTT液20 μl，4 h后每孔加入150 μl DMSO振荡混匀，酶标仪测定490 nm处的吸光度，计算抑制率。抑制率=（1－给药组D值/空白组D值）×100%。 1.2.3 苏木精-伊红染色 用1640培养液稀释肿瘤单细胞悬液浓度至2×105/ml，以每孔1 ml单细胞悬液接种于6孔板中，培养板每孔内放置3枚直径10 mm的圆形盖玻片。按照实验分组设计，每组每孔分别加入含有TGZ的培养液各1 ml。当SGC7901细胞与TGZ共同培养72 h后，取出6孔板内的玻片，4%多聚甲醛固定5～10 min，取出晾干，干燥彻底后即可进行苏木精-伊红染色，观察形态学改变。 1.2.4 免疫组织化学染色及I 1640培养液稀释肿瘤单细胞悬液浓度至2×108/L，以每孔1 ml单细胞悬液接种于24孔板中于37℃、5%CO2培养箱内培养，待细胞贴壁后，按照上述实验分组设计，每组每孔分别加入含有TGZ的培养液各1 ml，培养48 h、72 h后，收集细胞，70%冰乙醇固定，PI染液染色后采用Beckon/Dickinson FACS Calibur型流式细胞仪进行流式细胞术检测，在488 nm波长处进行检测，记录激发波长493 nm处的红色荧光。检测细胞凋亡与细胞周期改变。 1.3 数据处理 实验结果采用Stata8.0软件进行统计分析。各组数据均以±s表示，采用单因素方差分析，并采用Scheffe法分析组间差异。检验水准：α=0.05。 2 结 果 2.1 PPARγ在胃癌中表达 在轻度不典型增生、重度不典型增生及胃癌标本中，PPARγ阳性表达率为15.15％（5/33）、66.67％（14/21）、71.43％（60/84），轻度不典型增生与重度不典型增生及胃癌组间有统计学差异（P＜0.05） ，重度不典型增生与胃癌组之间未见统计学差异。 2.2 体外实验结果 2.2.1 MTT法检测应用TGZ对胃癌SGC7901细胞的生长的影响 SGC7901细胞与不同浓度的TGZ共同培养，细胞的生长受到不同程度的抑制，当药物作用48 h，TGZ浓度达50 μmol/L及以上时，与对照组相比P＜0.05，同时其作用具有浓度及剂量依赖性（表1）。 表1 TGZ作用48、72 h后对SGC7901细胞抑制作用与0 μmol/L组比较:△P 0. 05 2.2.2 形态学观察TGZ对胃癌SGC7901细胞的影响 SGC7901细胞与TGZ共同培养72 h，实验组肿瘤细胞的生长较阴性对照组逐渐稀疏，细胞体积变小、形态不规则、细胞皱缩、核固缩、胞浆空泡等形态学表现（图 1）。图1 TGZ作用SGC7901 后形态学表现（苏木精-伊红染色，10×40） 2.2.3 TGZ作用后胃癌SGC7901细胞PPARγ的改变 2.2.3.1 免疫组织化学方法检测TGZ作用后胃癌SGC7901细胞PPARγ的改变 PPARγ在SGC7901细胞中有较高表达，低浓度25 μmol/L组TGZ作用后与阴性对照组相比无显著性差异（P 0.05）；高浓度50 μmol/L组与阴性对照组及低浓度25 μmol/L组相比有显著性差异（P 0.05）（表2、图2）。 表2 TGZ作用72 h后PPARγ蛋白阳性表达率 2.2.3.2 期的细胞比例之间的差异无统计学意义（P 0.05）（表4）。表4 TGZ对SGC7901细胞周期的影响与0 μmol/L组比较：△P 0. 05 3 讨 论 PPAR是一类由配体激活的核转录因子，它是由英国科学家Isseman