Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用论文.docVIP

　　Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用论文 .freelin基因;反义核酸;成骨肉瘤;细胞系 摘 要:目的 探讨Stathmin基因的反义核酸（AS-ODN）对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用，并观察与化疗药物合用后的协同作用. 方法 以高表达Stathmin的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin（AS-ODN）为阻断剂，通过MTT试验观察AS-ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用及与紫杉醇（PTX）的协同作用，流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响. 结果 AS-ODN及AS-ODN与PTX联合应用均明显抑制成骨肉瘤细胞的生长（P 0.05，P 0.01）.SOSP-9607在AS-ODN作用下，细胞分裂阻滞在分裂期的中期，并诱导细胞发生凋亡. 结论 Stathmin基因的反义核酸（AS-ODN）对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重要的作用，它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点.freelin gene;antisense oligonucleotide（AS-ODN）;osteosara;cell line Abstract:AIM To investigate the inhibition of AS-ODN of Stathmin gene on cultured human osteosara cell lines and to observe the synergistic action ical drugs.METHODS Human osteosara cell lines SOSP-9607，in，an osteosara cell lines and the synergistic action ethod.The influence of cellproliferation cycle eter.RESULTS The groetaphase and cell apoptosis in gene may play a crucial role in the groay be the neent to osteosara and have the synergistic action ical drugs. 0 引言 成骨肉瘤（osteosara）是人类常见的原发性恶性骨肿瘤，死亡率和致残率很高［1］ .成骨肉瘤的发生可能为多重染色体畸变的结果［2］ ，最终导致癌基因激活或抗癌基因失活，两者均导致细胞生长调节控制信号的紊乱.正是由于这些关键性基因的差异表达导致了骨肉瘤细胞分化的失控.Stathmin（又称为op18，p18，p19，Prosolin及Metablastin）为一种高度保守的细胞内蛋白.TT试验（测定AS-ODN及AS-ODN与PTX联合应用对SOSP-9607细胞生长的抑制作用） 取对数生长期的SOSP-9607细胞，调节细胞密度为5×107 L-1 各取0.2mL加入96孔板中，分别标记正义组，反义组，及联合用药组.正义组和反义组分别加入终浓度均为20μmol L-1 的S-ODN和AS-ODN;联合用药组加入终浓度为0.1μmol L -1 的PTX和同上终浓度的AS-ODN，每组设3个复孔，培养后1，2，3和4d进行台盼蓝染色细胞计数，计算生长抑制率［（对照组细胞数一处理组细胞数）/对照组细胞数］. 1.2.2 流式细胞仪分析 流式细胞仪（FCM）分析采用Nicolletti氏法.将终浓度为20μmol L-1 的S-ODN和AS-ODN与SOSP-9607细胞共同培养3d后，离心去培养液，DBS洗涤2次，0.2mL PBS重悬SOSP-9607细胞，用吸管快速吹打进预冷的700mL L-1 乙醇中，4℃保存，检测前离心去乙醇，碘化丙啶染色15min，上机检测.所用流式细胞仪为Epics Elite（美国），汞激光激发波长为488nm.结果分析软件为Elite4.0和DNA Multictycle. 统计学处理:数据以x ±s表示，显著性差异采用t，χ2 检验. 2 结果 与正义组相比，反义组及联合用药组对SOSP-9607细胞生长均具有明显的抑制作用，联合用药抑制作用更明显，统计分析有显著性差异（P 0.05，P 0.01）.联合用药组抑制率明显高于单独用药（反义组）（P 0.05，Tab1，Fig1）. 表1 不同时间药物对SOSP-9607细胞生长的影响 略 图1 用药后细胞生长曲线 略 细胞周期分布分析:AS-ODN（20μmol L-1 ）处理细胞3h后，可见细胞G2 /M期百分比增高;至48h，G2 /M期百分比达55.5%.亚二倍体峰（sub-G1 ）表