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第九章 噬菌体 噬菌体(Bacteriophage)又称细菌病毒(bacterial virus)，具有其它病毒的共同特性。 在自然界中分布广泛，土壤、空气、水中或生物体内都可存在。 据噬菌体与宿主细胞的关系可分为: 烈性噬菌体（virulent phage） 温和噬菌体（temperate phage） 据噬菌体的核酸类型、粒子形状和有无囊膜存在，可分为12个科。 噬菌体 噬菌体的危害 噬菌体的危害 1. 不用可疑菌种 2. 环境卫生 3. 不排放或丢弃活菌液 4. 注意通气质量 5. 管道及发酵罐灭菌彻底 6. 筛选抗性菌种 7. 严格执行会客制度 发现污染后及时采取措施： 1. 尽快提取产品 2. 药物抑制(金属螯合剂、表面活性剂等) 3. 改用抗噬菌体生产菌株 苏云金芽孢杆菌——防治农林害虫 生产过程中易受噬菌体的侵染，严重影响了细菌农药的生产和应用。　　 苏云金芽孢杆菌噬菌体的特征： 头部为多面体，有颈部，尾部由尾管和尾鞘组成。 噬菌体的应用 鉴定细菌的分型； 重要的实验工具和理想的材料； 预防和治疗传染性疾病； 测定辐射剂量； 检测植物病原菌； 筛选目的基因或检测基因产物的活性。 肠道菌噬菌体：伤寒菌、痢疾菌、肠球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、链球菌和葡萄球菌等噬菌体。 存在于患者的粪便、医院污水、临床标本及外科病房脓液等。 噬菌体展示技术（Phage display techniques） 一种基因表达和表达产物亲和选择相结合的技术。 以经过改建的噬菌体为载体，把外源基因插入噬菌体外壳蛋白质基因pIII或PVIII 区，从而使表达的外源肽显露在噬菌体颗粒的表面，并使表达产物呈现良好的空间构型、由此提供可用亲和免疫纯化法筛选表达特异肽的噬菌体，并通过测定插入的DNA序列，推断所表达目的基因的氨基酸序列。 用活的噬菌体方便而高效地筛选目的基因，或检测基因产物的活性。 Phage display techniques 构建噬菌体展示文库——以一组随机多肽编码序列或基因群体插入噬菌体展示载体。(每个噬菌体粒子只展示一种序列的外源肽链) 筛选——亲和选择方法挑选出带有外源基因的重组噬菌体 扩增——再感染E. coli。 用于抗体基因文库、cDNA文库、随机多肽基因文库和突变基因文库构建/筛选等研究 Phage display techniques 兴于1990S初，简化了抗体库构建及单克隆抗体的筛选过程，很快应用于人工抗体制备，并迅速扩展到生物学等其他许多领域。 一般使用丝状噬菌体，外源基因插入到噬菌体展示载体上，使其与编码噬菌体外壳蛋白基因相连，从而使外源基因编码的多肽或蛋白质与外壳蛋白以融合蛋白形式展示在噬菌体表面，被展示的多肽蛋白可保持相对独立的空间结构和生物活性。 * * Electron micrograph of ssRNA phage MS2 attached to F pili. Virions attach along the length of the sex pilus via the maturation protein. 主要存在于发酵工业。如乳制品、酶制剂、氨基酸、有机溶剂、抗生素、微生物农药和菌肥生产等。 一旦发生噬菌体污染，会导致发酵异常、倒罐,使工业生产遭到严重损失。 微生物发酵污染分析(比例%) 发酵产品 空气系统 环境污染 设备 消毒操作 管道 二级种子 味精 30.33 33.25 14.63 10.73 4.07 1.63 抗生素 11.13 33.85 19.96 9.64 25.39 发酵液受噬菌体污染时出现： 发酵周期延长 C源消耗缓慢 发酵液变清，镜检有大量异常菌体 发酵产物不形成或少 敏感菌检查有噬菌斑 电镜检查有噬菌体粒子 预防噬菌体污染 噬菌体的防治 丙酮丁醇梭菌噬菌体 （Clostridium acetobutylicum phage） ?????????????????????? 在丙酮丁醇连续发酵的工业生产中，容易受到该噬菌体的侵染，危害极大。 常见的异常发酵有： 发酵停止，不产生气泡，醪液上层澄清，呈暗黑色，出现睡眠症。 正常发酵12-18h，丙酮产量可达200mg/L，异常发酵时达到相同水平则需36-42h，丁醇量也偏低 ，醪液的蒸馏效率低于正常的10-20%。 现分离获得的丙酮丁醇梭菌噬菌体为肌尾和长尾噬菌体科。 国内谷氨酸生产菌株——钝齿棒杆菌(T