变形链球菌基因疫苗pcDNA3gtfB鼻黏膜免疫家兔的实验研究论文.docVIP

　　变形链球菌基因疫苗pcDNA3gtfB鼻黏膜免疫家兔的实验研究论文 【摘要】 目的 观察变形链球菌防龋基因疫苗pcDNA3gtfB经鼻腔黏膜免疫日本长耳大白兔后的免疫反应性，初步观察不同剂量质粒pcDNA3gtfB免疫机体后的抗体效价。方法 实验分两部分，第一部分：30只日本长耳大白兔平均分为5组，每组6只，分别为：200 μg、400 μg 、600 μg pcDNA3gtfB质粒组，400 μg pcDNA3组，灭活全菌疫苗阳性对照组。质粒组及全菌组以1：1比例添加弗氏佐剂后进行免疫，共免疫两次。第二部分：采用间接ELISA法检测血液、唾液中特异性IgG、SIgA。结果 ①血液、唾液中抗体高峰时间为初始免疫后8～10周左右;②自免疫后1～2周.freelmunization, and observe the appreciate gene vaccine dose in rabbit immunization.Methods The study includes tly divided into 5 groups(each group 6) as folloid group，400 μg pcDNA3 group，inactivated ent the rabbits munized tid groups and ethod.Results ①The peak time of the antibodies appeared betmunization.②The specific antibodies IgG and SIgA could be detected 12 munization.③The level of salivary specific SIgA and serum specific IgG of pcDNA3gtfB id pcDNA3gtfB has immunogenicity, mune responses in rabbits.②The results of the present study shomunizational dosage to 1.5 kilograms Japan’s Longeared rabbits. ③400 μg and 600 μg pcDNA3gtfB can be considered as the optimal dosage at present experimental condition. 【Key utans，glucosyltransferase 变形链球菌(Streptococcus mutans, S.mutans)是公认的重要致龋微生物之一1，而其葡糖基转移酶(glucosyltransferase, GTF)是与粘附作用有关的重要毒力因子。GTF能利用蔗糖合成葡聚糖，介导细菌的蔗糖依赖性粘附及细菌之间的聚集2。其中GTFI合成的水不溶性葡聚糖对细菌粘附尤为重要而备受重视3。杨锦波等4利用S.mutans葡糖基转移酶抗原表位基因gtfB构建pcDNA3gtfB，并进行了基因疫苗的动物免疫研究。杨德琴等5则证明了应用该核酸疫苗经颌下腺区注射可以诱导大鼠产生特异型抗体IgG和分泌型免疫球蛋白A (secretory immunoglobulin A, SIgA)，并具有防龋功能。本研究旨在应用重组质粒pcDNAgtfB经鼻腔黏膜免疫日本长耳大白兔，观察其免疫反应性;并且以三个不同剂量重组质粒pcDNAgtfB免疫长耳大白兔，以期摸索免疫的较佳剂量，为该基因疫苗的防龋应用提供一定的实验依据。 1 材料与方法 1.1 材料 质粒和菌种：重组质粒pcDNA3gtfB的E.coliJM109(四川大学华西口腔医学院龋病研究室提供);真核质粒pcDNA3的E.coliJM103(四川大学华西口腔医学院教育部口腔生物医学工程重点实验室提供)。UA159(S.mutans血清c型，四川大学华西口腔医学院龋病实验室提供)。主要试剂：羊抗兔HRPIgG(Amresco公司，美国),羊抗兔HRPIgA(Geex公司，美国),弗氏佐剂(Sigma公司，美国),重组变形链球菌葡糖基转移酶(GTF,.freelid Giga Kit(Qiagen公司，美国)。 1.2 方法 1.2.1 质粒的制备：将含重组质粒pcDNA3gtfB或空质粒pcDNA3的E.coliJM109、E.coliJM103接种于含氨苄青霉素的LBAmpr液体培养基中, 于37℃恒温空气摇床剧烈振摇12 h，按QIAGEN试剂盒步骤大量抽提和纯化质粒。 1.2.2 灭活全菌体疫苗的制备：复苏变链菌UA159(血清c型)接种于TPY培