同时产CTXM22及TEM1型β内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析论文.docVIP

　　同时产CTXM22及TEM1型β内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析论文 【摘要】 目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法 采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β内酰胺酶(ESBLs)，等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果 阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性，ESBLs阳性.freel βlactamases (ESBLs) produced by E.cloacae clinical isolate EC003. Methods E.cloacae EC003 and detected by threedimensional extract test for AmpC βlactamases and confirmatory test for ESBLs; antimicrobial susceptibility ined ases ined by isoelectric focusing (IEF); plasmid e DNA plification; the PCR products icrobial susceptibility of the clone strains ases id EC003, tents id as template. The nucleotides and deduced protein sequences ases. The clone strain producing TEM1 picillin and piperacillin only, ost of βlactams and much more active to hydrolysis cefotaxime than to ceftazidine. Conclusions The cause of the E.cloacae EC003 to develop resistance to most of βlactams might be due to the simultaneous production of CTXM22 and TEM1 type βlactamases.收稿日期：20060630 阴沟肠杆菌是引起呼吸道和泌尿生殖道感染的常见病原菌，产生AmpC酶是其对β内酰胺类抗生素耐药的重要机制。但近年来研究报道证实了产生超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因，特别是产生多种β内酰胺酶所致的耐药问题越来越受到人们的关注［1，2］。我们在研究川北医学院附属医院临床分离产ESBLs菌株的基因型时，发现阴沟肠杆菌EC003同时含有两种β内酰胺酶，并分属其两大家族。现将研究结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌株来源 阴沟肠杆菌株EC003系川北医学院附属医院检验科分离，经法国BioMerieux公司API20E系列鉴定菌种。E.coli JM109［F′traD36 proA+ proB+ lacIq lacZ△M15/recA1 endA1 gyrA96 (Nalr) thi hsdR17 supE44 relA1 △(lacproAB) mcrA］由四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室惠赠，标准质控大肠埃希菌ATCC25922，标准质控肺炎克雷伯菌700603(产ESBL)由四川抗菌素工业研究所惠赠，TEM1(pI5.4)和SHV1(pI7.6)标准产酶菌由加拿大Queen′s大学医学院惠赠。 1.1.2 主要试剂 头孢噻吩(cephalothin，CET)为吉林辉南长龙药业生产；氨苄西林(ampicillin，ABPC)和哌拉西林(piperacillin，PIPC)购自Roche公司；舒巴坦(sulbactam，SB)为吉林辉南长龙药业生产；头孢哌酮(cefoperazone，CPZ)、头孢噻肟(cefotaxime，CTX)、头孢唑林(cefazolin，CEZ)、头孢呋辛(cefuroxime，CXM)、和头孢他啶(ceftazidime，CAZ)由哈药集团制药总厂生产。三唑巴坦(tazobactam，TB)为哈尔滨誉衡药业产品；亚胺培南(imipenem，IMP)购自Merck Sharp Dohme(上海)公司；头孢吡肟(cefepime，CPE)和氨曲南(aztreonam，AZ)为Bristo