麦芽总氮(蛋白质)的测定.docVIP

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2017-06-15 发布于北京
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麦芽总氮(蛋白质)的测定.doc

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实验麦芽总氮（蛋白质）的测定一、目的要求：学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法。二、实验原理：考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。三、试剂与器材： 1、试剂考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G―250 100mg溶于50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL。 2、标准和待测蛋白质溶液：牛血清蛋白，用0.15mol/L NaCl配制成1mg/mL蛋白溶液；待测蛋白质溶液：麦芽粉碎浸提液，根据实际情况稀释。三、器材试管；试管架；比色皿；移液管；恒温水浴；分光光度计。四、操作方法： 1、制作标准曲线取7支试管，按下表平行操作。试管编号 0 1 2 3 4 5 6 标准蛋白溶液（mL） 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.15mol/L NaCl（mL） 0.1 0.09 0.08 0.07 0.06 0.05 0.04 考马斯亮蓝试剂（mL） 5mL 摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595nm处比色 A595nm 2、未知样品蛋白质浓度测定测定方法同上，取合适的未知样品体积，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度（mg/mL）。五、思考题：（1）试比较该法与其他几种常用蛋白质定量测定方法的有缺点。