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肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)
1 目的
熟悉肺炎支原体检测(被动凝集法)标准操作规程,以便于更加规范化的操作,提高免疫检验质量,保证结果的准确性。
2 适用范围
适用于免疫室内肺炎支原体检测(被动凝集法)检测
3 职责
检验科主任负责组织人员制定肺炎支原体检测(被动凝集法)标准操作程序,免疫室组长负责组织人员具体实施。
4 该SOP变动程序
本标准程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,,并报经下述人员批准签
字:专业组长、科主任。
5 测定原理:
本试剂是一种检测肺炎支原体抗体的体外诊断试验,它用肺炎支原体(Mac株)细胞膜成分致敏人工明胶粒子制造而成。本试剂试验是基于以下原理:致敏粒子与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。
2标本采集:
随机静脉血2mL,分离血清备用。也可使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免无溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。
3标本存放:
室温放置不超过8小时,2-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存(应伟血清或血浆),应避免反复冻融。
4标本运输:
2-8℃密闭运输。
5标本拒收条件:
蛋白变性标本,标本中含有颗粒物质,细菌污染、严重溶血或止血标本不能作测定。
6试剂
6.1试剂名称:肺炎支原体抗体检测试剂盒(被动凝集法)
6.2试剂生产厂家:FUJIREBIO INC(富士瑞必欧株式会社)
6.3包装规格:5次定量测试×5(25人份)
6.4试剂盒组成:
完整的试剂盒提供下列试剂和附带器具
血清稀释液
(液体)致敏粒子
(冻干)未致敏粒子
(冻干)阳性对照
(液体)5次定量测试×530ml×1瓶1.5ml×5瓶0.5ml×3瓶0.5ml×1瓶6.4.1血清稀释液(液体)
用于稀释样品盒复溶致敏粒子及未致敏粒子
6.4.2 致敏粒子(冻干)
肺炎支原体(Mac株)抗原致敏的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。复溶后的试剂含0.9%致敏粒子 。
6.4.3 未致敏粒子
鞣化的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。
6.4.4 阳性对照(液体)
肺炎支原体(Mac株)抗体阳性的兔血清稀释液1:10稀释后的制品。当按照定量测定程序进行试验时,该阳性对照中肺炎支原体抗体的滴度为1:320。
6.4.5 附带器具
滴管 25ul×2支
“U”型微量反应板FASTEC
7 仪器和材料
7.1移液器:芬兰雷勃公司,每年由国家计量单位进行一次校准。
7.2离心机:Xiang Yi L500型号,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司,每年由国家计量单位进行一次校准
7.3自动振荡混合器(选用),平板观测器(选用)
8试剂要求:
试剂盒应置2-10℃,避光保存。
从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需要微孔反应条件应置37℃平衡30分钟后方可使用,余者应及时封存于2-10℃冰箱中以备以后使用。
9操作步骤
9.1试剂准备
试验前30分钟,用规定量的血清稀释液复溶致敏粒子和未致敏粒子。
9.2 定量测定(见表1)
9.2.1用一支经校准的滴管,向第1孔中滴加100微升,向第2~第8孔(或更多)中各滴加25微升血清稀释液。
9.2.2用微量移液管向第1孔中滴加25微升样品。
9.2.3用加样器或微量移液管,从第1至第8孔(或更多)进行对倍稀释。
9.2.4用试剂盒中提供的一支滴管向第2孔中滴加25微升未致敏粒子,用试剂盒中提供的另一支滴管向第3至第8孔(或更多)各滴加25微升致敏粒子。
9.2.5用平板混合器彻底混合各孔中内容物约30秒钟,以便充分混匀(小心不要将孔中内容物溅出)。给反应板加盖,在室温下(15~30摄氏度)静置3个小时,然后在平板观测器上读取凝集图像。静置过夜不会使图像产生显著变化。
表1:定量测定程序(单位:微升)
孔号123456789101112血清稀释液样品100
2525
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25血清稀释倍数1:51:101:201:401:801:1601:3201:6401:12801:25601:51201:10240未致敏粒子25致敏粒子25252525252525252525最终稀释倍数1:201:401:801:1601:3201:6401:12801:25601:51201:102401:20480用平板混合器混匀,加盖,然后静置3个小时 判
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