大肠杆菌高效表达重组蛋白策略概要.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2007，27(9)：103～109 大肠杆菌高效表达重组蛋 白策略木 任增亮 堵国成 陈 坚 吴 敬 (1食品科学与技术国家重点实验室 江南大学 无锡 214122 2江南大学生物工程学院 无锡 214122) (3江南大学工业生物技术教育部重点实验室 无锡 214122) 摘要 大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和 目前应用最广的经典表达系统。利用该 系统表达重组蛋白具有许多优越性，但其表达效率受诸多因素的影响。综述了国内外利用大肠 杆菌表达系统高效表达外源蛋 白的策略，主要包括选择合适的启动子、改变信号肽结构、提高 mRNA稳定性、提高翻译效率、表达稀有密码子、降低包涵体形成及蛋白降解，利用融合蛋白与分 子伴侣、调控发酵条件实现高密度培养等。 关键词 大肠杆菌 基因工程 重组蛋 白 克隆 表达 中图分类号 Q786 表达重组蛋白受许多因素的影响。如菌体生长特 过量表达外源蛋白尤其是对细胞有毒性的蛋白会严重 性，基因转录水平，产物到达部位，翻译后修饰过程以 抑制菌体生长而使蛋白总表达量下降；(3)启动子的诱 及蛋白的修复调控等…。虽然一些含复杂二硫键结构 导要求简便而廉价。现在比较常用的是温度诱导和 或者来源真核生物需要翻译后修饰的蛋白，不能利用 IPTG诱导 (表 1)。IPTG诱导主要应用于基础性研 E．coli系统 得到高效表达而选择植物细胞、哺乳动物 究，由于其毒性和价格昂贵而不能用来生产人类药用 细胞组织 和其它微生物宿主，但是大肠杆菌具有遗 蛋白。所以限制了tac和 trc启动子的广泛应用。温控 传背景清楚、繁殖快、成本低 、表达量高、表达产物容易 型诱导方式简单而且廉价，另外也有改造的启动子如 纯化、稳定性好、抗污染能力强以及适用范围广等优 突变的lac启动子 ，利用温度或IPTG都可以诱导。 点 ，是基因表达技术中发展最早和 目前应用最广泛 sD序列在起始序列上游 5～13bp处，可以消除 的经典表达系统 ，迄今已有大量有关该系统高效表 mRNA的电势而提高转录效率。RBS的3和5端都富 达重组蛋白的研究…。 含嘌呤碱基 。抗生素标记主要用来筛选重组子和提 供选择压，氨苄青霉素抗性标记最常用，但是在生产人 1 表达载体的构建 类药用蛋白时要考虑其它抗性标记，防止用药过程中 表达载体的构建是实现高效表达的关键步骤。一 出现对青霉素的过敏反应 。表达载体拷贝数决定于 个完整表达载体包含必需的几个元件 (图 1)。启动子 复制起点；使用强启动子和高拷贝质粒会降低宿主细 位于转录起始位点上游 一10bp～35bp，受载体 自身或 胞的存 活力而最终不一定能提高 目的蛋 白的产量。 宿主染色体相应的调节基因调控。一个理想的启动子 Kim等 ¨在 目的基因上游使用双启动子，有效提高了 需要具备如下特点：(1)具有强启动性，使重组蛋白达 表达量。 到菌体表达蛋白总量的10％～30％；(2)必须受调节基 因严谨调控。在一定菌体浓度下开始诱导表达，否则， 收稿 日期：2007-07—19 修回日期：2007-o8-21 教育部新世纪人才计划资助项 目(吴敬 )，江苏省 自然科学基金 资助项 目(BK2007019) }}通讯作者，电子信箱：jingwu@jian~an．edu．cn 维普资讯 l04 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vo1．27No．92007