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第一章 植物组织培养基本知识及操作技术 第一节 植物组织培养的一般原理 一、植物细胞全能性 二、细胞全能性的实现 离体的植物组织在组培条件下形成吴根苗、根、芽等器官的过程称为器官发生。 植物细胞未经过性细胞的融合而通过与合子胚发生类似的途径形成完整植物的过程称为胚胎发生。 第二节 植物组织培养实验室的建立 二、主要单元功能介绍： 1. 准备室： 洗涤区：排水良好、地板耐湿 灭菌区：地面、墙面防潮、耐高温；绝缘 化学实验区：器皿洗涤、干燥、保存；药品称量、溶解；培养基配制；材料预处理；培养材料观察分析等。主要设备包括：工作台、药品柜、冰箱、烘箱、天平、蒸馏水器等。 2. 无菌操作室： 要求：无菌；光照好；墙面尽可能光滑、易消毒；防止空气对流；具有消毒措施（甲醛熏蒸、紫外灯照射） 设备：超净工作台；接种箱 3. 培养室：满足植物材料的生长 要求：采光；保温；隔热；控温；控光；暗室 设备：培养架；控温设备 4. 细胞学实验室：培养材料的分析、照相 设备：显微镜、解剖镜、染色设备 三、常用仪器设备 （一）仪器 1. 天平 精度1/10 药物天平：大量元素、蔗糖、琼脂 精度1/10000 分析天平：维生素、激素、微量元 素及附加物 精度1/1000 扭力天平： 2. 灭菌锅 普通医用灭菌锅 大的高压灭菌锅 培养基、水、各种器皿的消毒灭菌 3. 烘箱（干燥箱） 80℃ 测定植物组织干重 80-100 ℃ 烘干物品 150-160 ℃ 干热灭菌 4. 冰箱 试剂和母液的贮藏；细胞及其他材料的冷藏保存；植物材料的处理等。 5. 酸度计 培养基及酶制剂的pH值调整 6. 超净工作台 7.蒸馏水器/纯水器 8. 细胞培养设备 9. 培养架 （二）必要器皿 1. 玻璃器皿 培养器皿：培养皿、试管、三角瓶 盛装器皿：烧杯、试剂瓶 计量器皿：量筒、容量瓶、吸管 其它：漏斗、玻棒、滴瓶 2. 金属器皿 镊子类 剪刀类 分离器械 （三）常备药品 1. 大量元素、微量元素、维生素、氨基酸 2. 糖类：蔗糖、果糖、葡萄糖 3. 凝固剂：琼脂、凝胶 4. 激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素 第三节 植物组织培养的一般技术 一、外植体的选择和处理 二、培养基及制备 三、无菌技术 四、培养环境 一、外植体的选择和处理 1. 外植体的类型 分生组织 带芽外植体 胚 雌雄配子体 2. 外植体的选择和处理 取材植株预栽培 取材植株的预处理 培养材料的贮藏 外植体的预处理 外植体的消毒、灭菌 外植体的切离和接种 二、培养基及制备 （一）培养基的组成 1、无机营养元素(inorganic element) 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 [N、P、K、Mg、S和Ca等]。 2、有机化合物(organic compound) 在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 种类：VBl(盐酸硫胺素)、 VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、 Vc（抗坏血酸）、 VH(生物素)、 VB11(叶酸)、 VB12（钴胺素)等。 使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L， 作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 使用浓度：为10—200mg／L。 3、有机附加物 （天然复合物） 4、植物生长调节物质(hormone) *作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。 在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5—10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。 吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸：NAA（naphthalene ac