凝胶成像介绍.pptVIP

The item of must be selected Function Type: DNA or protein 其他项目选不选都行。但Function Type一定要选。 Autochemi:暗箱灯光控件 调整相机辅助光圈、变焦和焦距 控制各种滤光片的选择。 控制各种照明光源。 灯光类型选择: 反射照明光:白光及二种波段紫外光 透射照明光:白光及三种波段紫外光。但紫外光波段需在紫外灯箱上手动选择。 安全选项:开门时关闭紫外光源。 箱门上有安全窗口可以即时观察荧光效果。 AutoChemi的必选项: Aperture:光圈。可调整亮度。 Zoom: 变焦。可调整画面的放大倍数。 Focus:辅助对焦。 Filter:选择滤光片。 Lighting:选择透射光源。 CoolSNAP-pro:相机控件 设置相机 选择图片保存方式 选择图像预览参数 选择拍摄曝光参数 积分方式拍摄极弱荧光 自动拍摄程序设定 对正凝胶块位置 按前述方法，在自然光下对正，避免频繁开关紫外光源。然后再打开紫外光源。一般用透射光源，用反射光源亦可。再次强调应调整相机变焦，使凝胶块图象尽量充满整个画面。这样有利于图象拍摄的清晰 8-bit gray scale… 这是拍摄照片的格式。作为平时使用的普通单色黑白照片都是八位灰度。但在本程序里用的是12位灰度。对光密度的测量更准确。所以在拍摄时不要使用8位图片格式。 12位灰度的图片很多常用的程序都不能识别所以需要转换。 保存图片方式: New image:每次拍摄都保存成一个新文件 Sequence:连续多幅拍摄并保存系列图片，用于拍摄动态画面，需设定拍摄间隔时间，拍摄画面数量等参数，但不能象摄相机那样拍摄录相。 Acquire: 点击Auto-Exposure options，才能看到自动曝光的设置窗口，确认未选择任何自动曝光功能。否则照下的画面与预览画面不会一致的。 另外不要调整Area，一般都需要拍摄满画幅的图片。 Intergration的特殊用处 这是专业拍摄亮度特别弱的荧光时采用的一种特殊拍照方法。对于平时肉眼可见的荧光样品是不必使用的。 实际上使用积分拍摄是很麻烦的。重要的是要作一个正确的空白样品，这非常困难。 Macros:宏操作 就是编程序执行一系列重复的操作。太高级了，还是别玩它吧。 记住设置完成后要点击minimal dialog回到小窗口，不要点击close。否则前面全都白干了。 Preview time = acquire expose time 必须把两个时间设为同样的值，才能使拍摄的效果与预览的效果一样。在正确设置时，两者会联动的。 曝光时间与光圈结合使用来调整曝光使画面亮度合适。 紫外照明光源是50Hz频闪光源，因此曝光时间不能太短，至少要大于0.1秒。 拍摄照片 点击acquire即可拍摄当前画面。 拍摄一张照片后屏幕上的窗口就是拍摄的图片了，要想重新回到预览窗口，得点击一下preview。 保存照片时存为TIFF格式较好。然后再另存一张jpeg格式的用于其他用途。 分析电泳条带 先关闭相机控件窗口和灯箱控制窗口 整理泳道 Add:加上未选中的泳道 Delete:删除错选中的泳道 Lane width:调整泳道宽度 Uniform lane width:勾上此选项，可保证各泳道宽度一致。 记得点OK后再进行下一步操作。 泳道跑歪了怎么办? 去掉Force straight lane前面的对勾，就可以调整泳道选择的方向了。不过这种难看的样品还是重作为好。 一条一条地整理带 程序自动识别的带数量很多，一般都要删除掉错误识别的带，只留下需要的带。也可以先删掉全部带，然后手动添加所需的带。 点击delete band，在错误识别的band上点一下就删掉它了，也可以在光密度曲线窗口上点，效果一样。 Add band的操作也一样。 对每个band的宽度要逐个调整。特别是相同分子量的条带，要尽量让它们的选择宽度一致。 较正背景 正规的背景较正需要拍摄一张空白样品作为背景，然后扣减其光密度。这种方法麻烦且实用价值不大，难以操作。 直接从光密度曲线上扣除基线背景较易实现，但要根据实例选择是否需要扣除基线背景。 在background窗口中选择joining valleys即可实现扣除基线背景。 扣除基线背景对光密度测量值的改变会非常大，是否应该扣除还需要根据样品情况来选择。 当Mark条不在左边时，一定要重新手动指定Mark条的位置 指定了Mark位置后，还要选取Mark类型，并检查各个标准点的分子量值是否正确。可以手动修改各点分子量的值。 注意各标准点的顺序:前面是大分子量，后面是小分子量。 Slant是什么东东? 如果各泳道的速度不一致，此功能可以进行有限的校正。前提是要