病毒感染的检查方法与防治原则—培训课件.pptVIP

医 学 微 生 物 学(Medical Microbiology) 第二篇 病毒学 第二十四章 病毒感染的 检查方法与防治原则 教学目标 熟悉： 人工主动免疫和人工被动免疫的常用生物制品。 了解： 病毒感染的实验室诊断方法。有效抗病毒药物的抗病毒机制及应用价值。 思考： 病毒如此之小和活细胞内寄生，我们如何分离培养及检查？ 血清学诊断和分子生物学检查的理论基础是什么？ 可通过什么方式预防病毒的感染？ 对抗病毒有招--巴斯德在1889年发明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈现在人们的眼前仅仅百余年的历史，但明确的病毒致病的记载早在四百多年前就有了。早在1566年，疯狗咬人致病的案例已经被记录下来，但直到1885年，人们还不知道狂犬病到底由什么引起。 在细菌学说占统治地位的年代，巴斯德的试验为狂犬病的防治开辟了新的路径。巴斯德发现，将狂犬病延髓提取液多次注射兔子后，再将这些毒性已递减的液体注射狗，狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。  1885年的一天，人们把一个被疯狗咬过的9岁男孩迈斯特尔送来求救，巴斯德给这个孩子注射了毒性减到很低的提取液，然后再逐渐用毒性较强的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。 第一节 病毒感染的检查 检 测 内 容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒分离培养方法类型 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 标本 无菌处理 细胞培养 鸡胚培养 动物接种 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2～3代 指标阴性 病毒阴性 一般程序 1.动物接种 最原始 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 2.鸡胚接种 孵化9～14天的鸡胚 3.细胞培养 在一定条件下用离体的活组织或活细胞培养病毒的方法 证实病毒存在的方法： ① CPE ② 红细胞吸附及凝集 ③ 干扰现象 ④ pH值改变 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 如腺病毒等多数病毒 腮腺炎病毒感染细胞 红细胞吸附（hemadsorption） HA＋红细胞表面HA受体→细胞吸附 病毒胞膜表面血凝素(HA) ＋ 相应抗体＋红细胞→吸附抑制 红细胞吸附抑制试验 干扰现象（interference） 风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋) ＋人胚肾细胞 风疹病毒 埃可病毒 CPE(-)—风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)—风疹病毒(-) 埃可病毒(+) （二）病毒的鉴定 1.形态学鉴定 电子显微镜 2.病毒的血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 血凝抑制试验、免疫标记 3.病毒分子生物学鉴定 三、病毒感染的诊断（一）病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）或包涵体，对一般病毒检测意义不大 （二）免疫学检查法 检查病毒抗原 ELISA 血凝抑制试验、中和试验 检查病毒特异性IgM 风疹病毒、甲型肝炎病毒等 （三）检查病毒核酸 核酸杂交技术 PCR技术 第二节 病毒感染的防治原则 一、人工主动免疫常用生物制品 灭活疫苗、活疫苗； 基因工程疫苗； 亚单位疫苗； 核酸疫苗 二、人工被动免疫常用生物制品 免疫血清 血清丙种球蛋白 细胞因子等 三、病毒感染的治疗 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗 抗病毒 化学制剂 反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（ribozyme） 核苷类药物 碘苷 阿昔洛韦 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 总结 病毒感染的检查方法与一般程序。 病毒感染的特异预防 病毒感染的治疗 思考题 1.分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？ 2.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂