无菌检查操作规程2015程序.doc

无菌检查操作规程 目的 建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。 使用范围 本公司无菌产品的无菌检查 职责 质量部QC 依据 2015版《中国药典》通则1101 GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998） 《疗器械的灭菌 微生物学方法 第 2部分：确认灭菌过程的无菌试验 《医用输液、输血、注射器具检验方法 第 2部分：生物学试验方法无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，无菌检査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境。全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染 洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求。 无菌检查操作还需要对检查环境进行监控， 培养基、稀释液、缓冲液 硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。除另有规定，接种后应置30~35℃培养。 胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。接种后应置20~35℃培养。 中和或灭活用培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。 沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。 沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。 PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。 0.9%无菌氯化钠溶液。 培养基使用性检查 无菌检査用的硫酸流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。本检查在供试品的无菌检査或与供试品的无菌检査同时进行。 取514天，应无菌生长。 灵敏度检查 菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以证试验菌株的生物学特性 。 [CMCC(B)26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 生孢梭菌[CMCC(B)64 941] 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的培养物至硫乙醇酸流体培养基中，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至氏葡萄糖液体培养基中或氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养24?48小时，上述培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于cfu(菌落形成）的菌悬液。接种曲霉的培养物至氏葡萄糖琼脂面培养基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液，将孢洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml孢子数小于cfu的孢悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内用；若保存在℃在内。曲霉孢悬液存在℃，在验证过的贮存期内用。 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结。 方法试用性试验 进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以所采用的方法适合于产品的无菌检查。若检验程序或产品发生化可能影响检验结时，应重新进行方法适用性试验。方法适用性试验按5.4供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法。 大肠埃希菌CMCC(B)44 102]外，色葡萄球菌、芽孢杆菌、生孢梭菌、白色珠菌、曲霉的菌株及菌液制同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制同色葡萄球菌。 薄膜过滤法：每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度下培养，培养时间不得超过5天，各试验菌同法作。 符直接接种法培养基用量要求的硫酸流体培养基6管，分别接入小于的葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管，取符直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基