第二周：细菌的芽孢染色.ppt

细菌的芽孢染色及观察 实验目的 1、了解细菌芽孢形态 2、了解芽孢染色原理 3、掌握细菌芽孢染色步骤 实验原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状）。芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。 三 实验器材 1.活材料：培养36小时的枯草杆菌（Bacillus subtilis）。 2.染色液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液 3.器材：小试管（75mm×10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。 染色液的制备方法 1、5%孔雀绿染色液 将5g孔雀绿在研钵中研细，加入少许95%乙醇溶解，再加蒸馏水。 2、0.5%番红染液 2.5%番红母液，2.5g番红，95%乙醇溶液100mL，混匀单独保存。 将2.5%番红乙醇溶液20mL，加入80mL蒸馏水混匀即成。 观看芽孢染色视频，思考并回答问题： 芽孢染色过程中，你认为最重要的影响结果的步骤是哪一步？ 方法2：Schaeffer—Fulton氏染色法 1、取37℃培养18-24h的枯草芽孢杆菌涂片、干燥、固定 2、滴3-5滴5%孔雀绿染于涂片上。 3、用试管夹夹住载玻片一端在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计算时间约4-5分钟。加热过程中切勿使燃料蒸干，必要时加燃料。 4、倾去染液，待玻片冷却后用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 5、0.05%碱性复红复染1min 6、制片干燥后用油镜观察。芽孢绿色，菌体红色 方法1：改良的Schaeffer—Fulton氏染色法 （1）制备菌液：加1—2滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2—3 环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 （2）加染色液：加5%孔雀绿水溶液2—3滴于小试管中，用接种环搅拌使染 料与菌液充分混合。 （3）加热：将此试管浸于沸水浴（烧杯），加热15—20min。 （4）涂片：用接种环从试管底部挑数环菌液于洁净的载玻片上，做成涂 面，晾干。 （5）固定：将涂片通过酒精灯火焰3次。 （6）脱色：用水洗直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 （7）复染：加蕃红水溶液染色5min后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸 水纸吸干。 （8）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜观察。 * *