杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究论文.docVIP

　　杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究论文 曾建春， 樊粤光 刘建仁，曾意荣，李显彭，易春智 【摘要】 目的研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响。方法将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板，3组，每组8孔;2块6孔板，每板3孔.freelmol/L，地塞米松0.1 μmol/L，维生素C 50 mg/L)，杜仲组为含10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基。分别自加诱导液第1天起，采用MTT法测量96孔板细胞数，每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色。结果杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势，而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性，第13天起可见白色钙结节，第20天茜素红染色阳性。结论杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，并刺激细胞增殖。 【关键词】 杜仲; 骨髓间充质干细胞 ; 成骨细胞 Abstract：ObjectiveTo study the generation and directional differentiation of BMSCs induced by Duzhong(eumia bark ) illiliter, all the holes ed blank group, DXM group and Duzhong(eumia bark ) group , each group had eight holes or three holes, tedium and added needium. The medium of DXM group contained 10mmol/L β-sodium glycerophosphate, 0.1 μmol/L DXM, 50mg/L vitamin C, that of Duzhong(eumia bark ) group contained 10% blood serum containing Duzhong(eumia bark ). Measured cell number of 96-hole plates from the second day to the eighth day, one of the 6-holes plates ia bark ) group rose obviously, blank group and DXM group had no obvious ascensus; on the tenth day DXM group and Duzhong(eumia bark ) group asculine; nodus could be seen on the undersurface of the holes 13days later, containing Duzhong(eumia bark ) can induce BMSCs differentiate to osteoblast and stimulate groia bark ) ; MSCs; osteoblast 间充质干细胞 (MSCs ) 是一种多潜能成体干细胞，主要存在于骨髓，还存在于胚胎时期间充质来源的骨外组织，如皮肤成纤维细胞、脂肪干细胞、骨骼肌的卫星细胞和血管内皮细胞等。骨髓MSCs ( BMSCs )是骨髓基质的组成成分，体外分离培养后，在一定的诱导条件下，具有向成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多向分化的能力。在骨组织工程的种子细胞来源主要有成骨细胞和BMSCs等。成骨细胞虽然具有良好成骨活性，但来源有限，大量分离获取困难，体外大量扩增的潜力不足，难以满足骨组织工程临床应用的需要;BMSCs不仅具有良好的成骨细胞分化潜能和高成骨活性，而且具有强大的增殖潜能，来源方便，可以满足自体组织工程。中医认为，肾主骨，生髓。本实验拟研究补肾中药杜仲含药血清对BMSCs增殖及定向分化的影响。 1 材料与仪器 1.1 动物 SPF SD大鼠50只，体重150～200g，雌雄不限，由广州中医药大学实验中心提供。 1.2 试剂 L-DMEM培养基、南美洲胎牛血清(FBS、海克隆)，β甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C、茜素红、MTT(广州威佳)，DMSO(sigma)，杜仲(产地云南)，碱性磷酸酶染液、碱性磷酸酶试剂盒(南京建成生物有限公司)，0.25%胰酶(GIBCO公司)。 1.3 器材75cm2培养瓶、96孔板、6孔板(Coning)，酶标仪(Thermo)，CO2培养箱 (Heraeus)，注射器针头滤器，0.22μm滤膜(MILLIpore)，SIGMA-3K15离心机(si