紫外可见分光光度法培训.ppt

紫外-可见分光广度法 第一节 紫外-可见分光广度法概述 紫外-可见分光广度法：是通过测定被测物质在紫外-可见光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。236 光谱：光被色散后形成的景象，如彩虹。每一种颜色为单色光。 光有互补性：红—绿；黄--蓝；如高锰酸钾、硫酸铜的颜色。 第一节 光的几个物理常数237 波长：指从一个波峰顶到下一个波峰顶的距离。1nm=10-9 m。 频率：每秒钟发出的波的数目。 光速：光在真空中的传播速度2.9979* 10-10 cm秒。 光的纯度：单色性，指某单色光的波长区间的范围。宽度越窄越好。 第一节 紫外-可见分光广度法特点448 常用波长的范围： 紫外区：200-400nm；可见区：400-760nm 红外区：2.5-25um 涉及仪器；紫外分光光度计、可见分光光度计、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。 特点：灵敏度较高，一般可达10－4～10－6g/ml, 最低可测浓度一些情况下10－7g/ml 。准确度一般为0.5％，好仪器可达0.2％。 第一节 紫外-可见分光广度法 基本原理448 1、原理：紫外可见吸收光谱由分子中价电子在不同分子轨道之间跃迁而产生的。有单键σ电子、双键π电子和非成键n电子。轨道不同，电子所具有能量不同。 2、有机化合物吸收光谱：σ→ σ*跃迁、n → σ*跃迁、π→ π*跃迁、n→ π*跃迁和电荷迁移跃迁产生。 3、无机化合物吸收光谱：电荷迁移跃迁及配位场跃迁。 基本概念 （1）生色团（chromophore）：能在紫外-可见光范围内产生吸收的原子团。 例： — CH＝、CH — ； — C＝O；—N＝N— 2）助色团（auxochrome)：是指含有非键电子的杂原子的饱和基团，当它们与生色团饱和烃相连时，能使吸收峰位置向长波方向的移动，并使吸收强度增大。 例：—OH，—OR，—NH—，—NR2—，—X （3）吸收带（absorption band）：说明吸收峰在紫外－可见光谱中的位置。吸收位置取决于分子中生色团和助色团位置。以及共轭情况。并受溶剂效应和PH影响。吸收带可推测化合物结构。 第一节 Lamber-Beer定律449（一）吸收光谱法基本定律 描述物质对单色光吸收强弱与吸光物质液层厚度和浓度的关系 假设一束平行单色光通过一个吸光物体 续前 2．吸光系数两种表示法：450 1）摩尔吸光系数ε： 在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分吸光系数 / 比吸光系数　　： 在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系 在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 第二节 紫外－可见分光光度计 一、主要部件 1．光源： 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 续前 3．吸收池：为减少光的损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。 光学玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 熔融石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（T0.3%（对光的吸收和反射应一致） 4．检测器：将光信号转变为电信号的装置 5．记录装置：讯号处理和显示系统 光源 对光源的基本要求是应在仪器操作所需的光谱区域内能够发射连续辐射，有足够的辐射强度和良好的稳定性，而且辐射能量随波长的变化应尽可能小。 分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。钨灯和卤钨灯可使用的范围在350 ~ 2500nm。这类光源的辐射能量与施加的外加电压有关， 在近紫外区测定时常用氢灯和氘灯。它们可在200 ~ 400 nm范围内产生连续光源。氘灯的灯管内充有氢的同位素氘，它是紫外光区应用最广泛的一种光源，其光谱分布与氢灯类似，但光强度比相同功率的氢灯要大3~5倍。 图示 二、分光光度仪的类型： 1．单光束分光光度计： 特点： 使用时来回拉动吸收池 →移动误差 对光源要求高 比色池配对 在测量样品前，利用机械装置分别将样品池置入光路，利用电路的补偿装置将吸收度调零；然后将样品溶液置入光路，读出样品溶液的吸收度。 具有较高的信噪比，光学、机械及电子线路结构简单、价格便宜。 续前 2．双光束分光光度计： 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 对光源要求不高 可以自动扫描吸收光谱 （三）仪器的校正 第三节 应用239 一、