色谱分析一般步骤.ppt

定性和定量分析 定性分析 比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光 常采用已知标准物质对照（同一板上展开） 多种展开系统的Rf值与对照品一致。 定量分析　 　洗脱法 　直接定量法 　　　　1.目视比较法（如杂质限度检查方法） 　　　　2.薄层扫描法 参考文献 杜斌、张振中，现代色谱技术，河南医科大学出版社，第108—151页（2001）. A.Elatkis著，洪筱坤、王智华、曾一译，《层析理论与应用》，上海科学技术出版社，第122—126页（1981）. Camag Catalogue ,“Instrumental Thin Later Chromatography”, TL-9-E(1981). D. Nurok, R. M. Becker, K. A. Sassic, Anal. Chem., 54, 1955(1982). E.Stahl,“Thin Layer Chromatography”, 1st Ed., Springer Verlag/Academic Press(1965), 2nd Ed.(1969). 色谱分析的一般步骤 色谱法分离的基本原理 色谱法分离的基本原理是基于组分通过互不相溶的两相而达到分离的。即样品溶解在流动相(Mobile Phase)中，从装填在柱子中或涂渍在载体表面的固定相(Stationary Phase)上通过，依据组分与固定相之间的相互作用力的不同，经过充分的运行时间，它们即可被分离。 色谱法是一种分离技术，这种分离技术应用于分析化学中，就是色谱分析。 最早的色谱分析法是俄罗斯植物学家Michail- Tswett在1906年，将碳酸钙装填在玻璃管(也称为色谱柱，Column)内，石油醚洗脱，用于分离植物叶子中的叶绿素，植物叶子的提取液在通过柱子后，在柱床上出现了不同颜色的色带，因此他将这种方法命名为色谱法(Chromatography)。这就是最早使用的柱色谱法。 色谱法的分类 依据展开后色谱图的类型，可将其分为: 内色谱法 外色谱法 内色谱即样品中的各组分在相同的时间内有不同的迁移距离。但最终的分离仍在柱床上，并可检测。这种类型的色谱法称为平板色谱，如纸色谱和薄层色谱。固定相涂敷在平板上，流动相通过毛细管力而移动或通过重力的影响而通过固定相。 外色谱法即柱色谱法(Column Chromatography),即是说，在气相色谱、高效液相色谱或液体色谱中，所有的组分在相同的流动相推动下通过柱床，由于组分与固定相之间特殊的作用力，各个组分在柱后显示了不同的保留时间，并可用外部连接的检测器检测。 薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC) 薄层色谱法基本原理 TLC是20世纪50年代从经典色谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种微量分离分析方法。 TLC法具有设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观等优点。 定义 固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，在装有流动相的密闭的容器中展开，斑点显色，与对照物质比较进行定性定量分析。 特点 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。 试样预处理简单，对试样限制少。 仪器简单，操作方便。 分离能力较强。 灵敏度较高 分类 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法 　　　　 离子交换薄层色谱法 主要技术参数 比移值 相对比移值 分配系数 分离度 比移值(Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比。 Rf =b/a b为原点至斑点中心的距离 a为原点至溶剂前沿的距离 与组分及色谱条件有关 相对比移值(relative Rf；Ri,s) Ri,s= b/a 与组分、色谱条件、参考物质有关。 Ri,s值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系统误差（参考物质与组分在完全相同的条件下展开） b a (b) Ri,s值 参比物i 被测物s 原点 前沿 × 分配系数 K= Cs /Cm 在分离达到平衡时，组分在固定相的浓度Cs和流动相的浓度Cm之比。 分离度 两个斑点中心距离与其平均宽度之比。 薄层色谱法操作流程 吸附剂或载体的选择及薄层的制备 点 样 展 开 定 位 定 性 定 量 色谱前衍生化 薄层板预平衡 薄层板的预 处 理 样品的制备 最基本材料及设备 滤纸