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单克隆抗体仿制药物的结构分析策略1．1仿制与原研单抗药物蛋白序列一致性判断的分析策略目前认为仿制单克隆抗体与原药的氨基酸序列必须完全一致，否则将被认为是新的抗体药物。对比分析通常在三个水平上进行: 完整抗体水平、还原抗体水平、肽图水平。并使用这三种数据结果间相互验证。1.2 仿制与原研单抗药物糖基化一致性判断的分析策略实际上，原药生产厂也无法保证其每批次单抗成品药物的糖基化形式完全一致。因此，仿制药生产厂可以采取的分析策略是: 对多批次原研抗体的糖基化形式都进行表征，发现其糖基化形式的变化范围。之后证明仿制单抗药物的糖型结构在原研抗体糖型的变化范围内。抗体糖基化修饰的表征分为 3 个层面。全抗体糖型分析、糖基化位点分析、寡糖链分析。对单抗中寡糖的分析可以获得更加充分的定性信息以及更加准确的定量结果。使用糖苷酶将抗体中的寡糖链切割下并用 2-aminobenzamide 标记后，可通过色谱将寡糖混合物分离，使用荧光及质谱检测而进行寡糖水平分析。近年来，液相在寡糖分析方面取得了长足的进步，特别是 HILIC( 亲水相互作用色谱) 的发展，革命性地提高了液相分析寡糖的能力。毛细管电泳是另一种寡糖分析技术。它的理论塔板数高，在上世纪末成为分离领域的一个热点探索方向，但其具有重现性差等一些突出困难。由于毛细管电泳技术需要使用高盐缓冲液，目前几乎无法与质谱联用。因此，使用毛细管电泳进行寡糖定性必须具备相应的标准品。在无寡糖标品的情况下，将无法对寡糖定性。此外，对于不带电荷的中性寡糖，如常见的 Man5、Man6 等，毛细管电泳无法进行分析。而 Man 5 和 Man 6 被公认是造成抗体免疫原性的关键指标，因此这两个指标对抗体质量控制非常重要。如果细胞培养条件不合适往往会造成这类糖偏高，因此 Man5、Man6 也是细胞培养工艺控制的一个指标。而通过 UPLC 分离的寡糖可以在通过荧光检测器后进入质谱检测，直接测定寡糖分子量，从而对其进行定性，而不需要对照标品。加之 UPLC 卓越的分离度和精准的重现性( 图 2c) ，使 UPLC MS 系统优于毛细管寡糖分析系统。1.3 仿制与原研单抗药物高级结构一致性判断的分析策略在单克隆抗体高级结构分析中，二硫键链接检测是最基础的。1.4 其它蛋白药物表征的液质分析应用。EG 修饰蛋白及多肽类药物后，可在不产生毒性、不损害药效的情况下，通过增加蛋白类药物的溶解性、减少免疫原性、增加稳定性、延长体内药物半衰期等功效增强大分子药物的疗效。1.5 如何提高分析工作的效率及法规依从性。序列表达正确性、糖基化修饰形态相似性、以及高级结构一致性是抗体仿制药申报需要回答的三个基本问题。，使用 SEC 色谱柱分析单抗药物聚集情况、IEX 色谱柱分析单抗重链末端赖氨酸缺失等工作都已经有完备的 UPLC 解决方案。生产过程的法规依从性和分析过程的可追溯性