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专题2 细胞工程2.1植物细胞工程 2.1.1植物细胞工程常用的技术 植物组织培养 植物组织培养的培养基 无机营养成分:无机盐离子 有机营养成分: ① 含N物质:包括维生素和氨基酸 ② 碳源:2%—5%的蔗糖溶液,调节渗透压 ③ 琼脂:起支持作用 ④ 激素:生长素,细胞分裂素和赤霉素 PH值:5.0-6.0 植物组织培养的过程 2.1.2植物细胞工程的实际应用 繁殖植物的新途径 微型育种 作物脱毒 人工种子 育种新方法 单倍体育种 诱导突变体 细胞产物的工厂化生产 微型繁殖 概念:应用组织培养技术,快速繁殖植物(也叫快速繁殖技术) 原理:植物细胞的全能性 优点:繁殖率高,可大批量生产 取材少 培养周期短 保持优良性状 作物脱毒 病毒在作物体内逐年积累,会导致作物产量降低,品质变差 分生区附近(茎尖、根尖)的病毒极少,甚至没有 采用茎尖进行组织培养 人工种子 结构: 人工薄膜+胚状体(不定芽、顶芽、腋芽) 优点: 不受气候、季节、地域的限制 保留优良性状 时间短,占地少 技术: 组织培养 原理: 细胞全能性 单倍体育种 方法: 花药离体培养 技术: 组织培养获得单倍体 秋水素处理单倍体的幼苗,使染色体加倍 优点: 明显缩短了育种年限 后代稳定遗传 突变体的利用 利用组织培养时,分裂状态的细胞易受培养条件和外界压力(如射线,化学物质等)的影响而产生突变的原理,诱导并筛选出对人类有用的突变体。 细胞产物的工厂化生产 植物组织培养和动物细胞培养的比较 体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植-动物幼体产出 概率<10% 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体? 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 * 细胞工程 应用的原理和方法 研究的水平 研究的目的 细胞生物学和分子生物学 细胞整体水平或细胞器水平 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品 概念 分类 植物细胞工程 动物细胞工程 植物细胞工程的理论基础是: 植物细胞的全能性 植物细胞工程常用的技术是 植物组织培养 植物体细胞杂交 概念:细胞的全能性是指生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。 原因:是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质及发育为完整个体所必需的全部基因。 全能性高低: ①受精卵>胚胎干细胞>生殖细胞>体细胞 ②植物细胞>动物细胞 1、概念 植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下,将 离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。 2、植物组织培养的条件 1)离体细胞、组织或器官 2)适宜的外界环境条件,例如无菌、适宜的温度、湿度、光照等 3)培养基(一定的营养物质,激素) 离体的植物器官、组织或细胞 脱分化(又叫去分化) 愈伤组织(排列疏松而无规则,高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞) 再分化 根或芽等器官 植物体 1、定义: 将两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞,且把杂种细胞培育成新的植物体的过程。 2、优势:(与有性杂交方法比较) 克服了远缘杂交不亲和的障碍,拓展了可用于杂交的亲本组合范围。。 植物体细胞杂交 植物A细胞 植物B细胞 去壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 融合体 再生壁 杂种细胞 细胞分裂 愈伤组织 杂种植株 去壁的常用方法: 酶解法(纤维素酶、果胶酶等) 原生质体融合方法: 物理法:离心、振动、电刺激等 化学法:聚乙二醇(PEG) 植物体细胞杂交过程示意图 红豆杉与紫杉醇 人参皂甘的生产 2.2 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 1.动物细胞培养的概念: 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、动物细胞培养过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 (分解弹性纤维) 3.动物细胞培养的条件: ①无菌、无毒的环境 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施:培养液中加抗生素,定期更换培养液 ②营养 糖、氨基酸、无机盐、微
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