14-DNA的复制和修复.PPT

第十三章 DNA的复制和修复 第一节 DNA的复制 (DNA replication) 3. DNA复制的方向为5 ’ →3’ ，是半不连续的 子链DNA的复制方向都是5 ’ →3’ ，所以母链的读链方向是3 ’ →5’。 一、DNA的聚合反应 从大肠杆菌中提取的DNA聚合酶Ⅰ，能在具备 底物：4种dNTP 模板：一条单链DNA 引物：一小段与模板配对的DNA或RNA， 具备3′-OH Mg2+ 的条件下，使4种 dNTP聚合起来。新加上的dNTP与引物的3 ′ -OH作用，形成3′, 5′-磷酸二酯键，且所加上的核苷酸要与模板上的碱基互补配对，合成方向是从5′→3′。 二、与DNA聚合有关的酶 ⒈ DNA聚合酶 ⑴ 原核生物DNA聚合酶 DNA聚合酶Ⅰ (Pol Ⅰ)由大肠杆菌的polA基因编码的一条多肽链，分子量为109KD，每个大肠杆菌中约有400个Pol Ⅰ分子，它催化脱氧核苷酸聚合的速度为1000个/分。 Pol Ⅰ具有的功能： ⑴ 按5′→3′方向延长核苷酸链的功能； ⑵ 3′→5′外切酶的功能； ⑶ 5′→3′外切酶的功能； 该外切酶功能的特点是切去的核苷酸是正确配对的，这种功能在DNA的复制中引物的切除及DNA损伤的修复中起着重要作用。 DNA聚合酶Ⅱ( PolⅡ)也需要模板、引物、底物和Mg2+，合成方向也是5′→3′,也具有3′→5′外切酶功能，但没有5′→3′外切酶功能。它只在无PolⅠ和PolⅢ的 时候才发挥聚合酶作用,每个大肠杆菌中有约40个酶分子。 DNA聚合酶Ⅲ (PolⅢ)在大肠杆菌中的量只有PolⅠ的1/20，但活性比PolⅠ高40倍以上，每分钟能催化105个核苷酸的聚合，是大肠杆菌中真正负责合成DNA的聚合酶，由多种亚基组成。 复制的保真性 DNA聚合酶对模板的依赖性，是子链与母链能准确配对，使遗传信息延续、传代的保证。要确保DNA复制的保真性，至少依赖三种机理： ⒈ 遵守严格的碱基配对规律； ⒉ 聚合酶在复制延长中对碱基的选择作用； ⒊ 复制中出错时有及时的校对功能。 ⒉ DNA连接酶(ligase) 因为DNA聚合酶不能将3′-OH和5′-PO32-连接起来，所以不能形成闭合、连续的子链。 DNA连接酶是能催化一条DNA链的3′-OH和另一条DNA链的5′-PO32-之间形成磷酸二酯键的酶，但连接的都是碱基互补基础上的双链中的单链缺口，它并没有连接单独存在的DNA单链或RNA单链的能力，也没有连接超过两个碱基以上的缺口的能力。 常用的DNA连接酶有两种： ⑴ 大肠杆菌的DNA连接酶： 能催化粘性末端的连接； ⑵ T4DNA连接酶： 既能催化粘接，也能催化平头连接； 连接反应的能量来源： ① 细菌的DNA连接酶以NAD作为能量来源； ② 动物细胞和噬菌体的DNA连接酶以ATP为能量来源； ⒊ DNA引物酶(primase） 因为DNA聚合酶不能起始合成新的DNA链，所以需要合成一段引物提供3′-OH。 催化RNA引物形成的酶就是RNA引物酶，本质上属于以DNA为模板的RNA聚合酶，但与催化转录的RNA聚合酶有本质的不同：引物酶