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P53基因的研究进展 答辩人:徐松芹 专业：生物科学 指导老师：李师鹏 引言 P53基因是一种肿瘤抑制基因，定位于人类17号染色体短臂，编码p53磷蛋白，它发现于1979年。由于其在肿瘤抑制、老化等多个细胞过程中起重要作用，在上个世纪90年代到现在短短数十年间，关于p53研究的论文就超过2000篇。p53在多个细胞信号途径中起重要作用，这些途径可最终导致细胞周期停止、DNA修复、细胞水平上的老化、分化和凋亡。p53促进细胞在受损后进行修复，而那些受到严重受损的细胞也是由p53引导走向凋亡，从而保证整个器官不受损伤。 　　P53在不同年代研究的大致方向都是不同的，在最初发现的时候曾误以为p53是原癌基因，后来研究证实了那是由于p53突变才形成了癌症。可以在世界范围内的癌症患者身上发现p53基因的突变或丢失。p53发现的最初是在细胞周期关卡和对发育作用方面对其进行研究。在上个世纪90年代则是对它在基因组稳定中的作用进行研究，比如DNA修复、同源重组和染色体隔离（chromosomal segregation）；同时也开始对其在转录调控中抑制肿瘤的作用进行研究。而这个世纪研究的重点就落在了衰老、凋亡等使人老化的研究上。 　P53是研究得最深入的肿瘤抑制基因,在许多人类肿瘤中都有p53基因的突变,针对p53突变基因的治疗逐渐成为肿瘤基因治疗的重要手段之一。p53基因治疗肿瘤只是开了一个好头，为人类征服癌症带来了新的希望和曙光。除了作为肿瘤抑制基因外, p53还有许多重要的功能，包括细胞凋亡、细胞衰老、细胞周期调控等等。 一、??p53基因 (一)p53基因的结构 　P53基因在人类、猴、鸡和鼠等动物中相继发现后，对其进行了基因定位，人类 P53基因定位于17P13.1，鼠P53定位于11号染色体，并在14号染色体上发现无功能的假基因，进化程度迥异的动物中，P53有异常相似的基因结构[1]，约20Kb长，都由11个外显子和10个内含子组成，第1个外显子不编码，外显子2、4、5、7、8、分别编码5 个进化上高度保守的结构域，P53基因5个高度保守区即第13～19、117～142、171～192、236～258、270～286编码区[2]。 (二) p53的基因产物及功能 P53蛋白N一端为酸性区1～80位氨基酸残基，C-端为碱性区319～393位氨基酸残 基，正常的P53蛋白在细胞中易水解，半衰期为20分钟[3]，突变性P53蛋白半衰期为1.4～ 7小时不等，P53蛋白N端有一个与转录因子相似的酸性结构域，与GAL4的DNA结合区重组时，融合蛋白能激活GAL4操纵子转录，激活功能定位在P53第20～40位密码子，P53 细胞定位及反式激活功能提示，P53蛋白可能直接或通过与其他蛋白作用参与转录控制。 （三）p53基因结构和功能的相互关系 用DNA直接测序的方法检测肝癌细胞的p53基因结构[4]，在6株新建系的肝癌细胞中有4株发生p53基因突变，其中2种突变发生在p53-DNA相互作用结构域内，2种在结构域外。将含有p53反式激活元件的报告质粒mdm2-luc导入肝癌细胞，通过检测荧光素酶的表达水平，检测肝癌细胞中p53蛋白的转录活性。结果显示，发生在p53-DNA相互作用结构域以外的基因突变不影响p53蛋白的转录活性，而发生在p53-DNA相互作用结构域之内的基因突变则大大降低p53蛋白的转录活性。研究结果证明了p53是一种DNA结合蛋白，通过与特定的DNA序列结合而发挥其转录调节的功能。 二、??p53基因与细胞周期调控 细胞周期是细胞生命活动的基本过程,由细胞周期素(Cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)所推动。Cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进展起着正调控作用,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)通过在细胞周期适当的时间点上抑制CDK的活性,从而对细胞周期进展起负调控作用。Cyclin、CDK、CKI多因素相互协同作用,通过pRb途径和p53途径共同影响细胞周期进程。对细胞周期调控的研究有助于阐明肿瘤的发生以及终末细胞的分化,将为治疗肿瘤和诱导终末分化细胞的增殖提供有益的思路。 （一）G1期停顿 p53通过上调P21,mdm2,GADD45等基因在DNA损伤所致的G1/S停顿中起重要作用。P21wafl是Cdks抑制剂,通过阻断Cdks的活性阻止细胞进入S期[6]。DNA损伤可使ATM及ATR升高,这二者能使p53的15位丝氨酸磷酸化,部分阻止p53与MDM2作用,从而避免被泛素化修饰降解。G1期细胞受照射后Cdks/cyclin E复合物的含量由于与P21wafl的结合而升高。G1期特异性激酶活性的抑制能维持Rb基因表达产生p