常规病理切片的制备讲稿.docVIP

常规病理切片的制备（讲稿） 亲爱的各位领导，各位老师，大家好。能站在这个讲台上，对我来说本身就已经是一份莫大的荣誉，但我知道，这个讲台肯定不是属于我的。我在这里也只能是班门弄斧了。还真诚的希望各位不要见笑。如果有什么不对的地方，希望各位领导和老师能够提醒我，帮助我。因为我是分到了病理科，现在阶段的主要工作是病理技术。那么我今天就简要的介绍一下在我们科室常规病理切片的制备过程。 这里我们以常规手术标本为例： 一．收取标本。在手术室收取标本，并仔细核对标本的各项信息。如有误，应立即联系相应科室及医师。如仍然有误，则可拒收该标本。 二．固定。第二步和第一步并没有明显的时间上的先后顺序。其实，准确的说固定必须在收取标本之前就已经进行。因为活体的器官或组织在离体的那个时候就应该固定。因为器官或组织离体后，在自然状态下会立刻开始腐败和自溶。而组织或器官经固定液固定之后能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。2°C－4°C，一般浸蜡所用的蜡的为软蜡，熔点为４６摄氏度左右。 浸蜡程序为： 石蜡Ⅰ　　　１ｈ 石蜡Ⅱ　　　１ｈ 石蜡Ⅲ　　　１ｈ 五．包埋，包埋是将正确定位的组织包裹在一种介质中（此处以石蜡为例）然后固化。如今包埋机已经被广泛应用，机器最大的优点就是能够在每个步骤上都达到确的温控 。 包埋的具体过程为：先将熔化的石蜡倾入包埋模具中，再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定的组织面向下埋入熔蜡中，应将组织块平整地置放于包埋模具底面的中央处。包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并处于同一水平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋（立埋）。 包埋所用的蜡一般为硬蜡，其熔点为60摄氏度左右。包埋机的温度也设置在石蜡熔点以上2°C－4°C。 六．冷冻凝固，包埋好的组织石蜡块放于冷冻台上，待石蜡凝固，然后就可以切片了。 七．切片、摊片、烤片，将凝固的石蜡块从模具中取出并按顺序摆放于冷冻台上，待切片。我们科室的切片用的是手动切片机。切片的过程并不复杂，需要的只是一个熟练过程和必要的理论知识。大致的步骤为开始是修片，使待切的组织面完全暴露，再切成3μm厚度的组织片。切片的厚薄是开始设置好之后由机器控制的。然后是摊片，分两步，一是将切下来的组织片放入30%酒精溶液中进行第一次摊片，再用玻片取出后放入45摄氏度左右的水中进行第二次摊片。摊片是利用溶液和温水的张力，使切下来的组织片变得平整无皱褶，便于诊断。摊片完成之后，用玻片取出组织片使其附着于玻片上。然后就是将玻片放入烤片箱中烤片。时间为30分钟。烤片的目的一是使位于组织细胞外的石蜡熔化达到初步脱蜡的目的，二是使组织更牢的粘附于玻片上，使其在染色过程中不会脱落。 八．染色，我们科室的常规病理切片都是用的苏木精—伊红（HE）染色，它也是目前应用最为广泛的组织病理学常规染色技术。 染色的具体程序为： 二甲苯Ⅰ　　　 5-10min 二甲苯Ⅱ　　　 5-10min 二甲苯Ⅲ　　　 5-10min 无水乙醇Ⅰ 1-3min 无水乙醇Ⅱ 1-3min ９５％酒精 1-3min 流水洗 苏木素 10min 流水洗 1％盐酸酒精 1-3ｓ 流水洗 伊红　　　　　 1-3ｓ 流水洗 简单原理为： 前面我们已经说过通过烤片，可以脱去细胞外的蜡。而二甲苯的作用就是脱去细胞内的蜡，方便染色。而后面乙醇的作用就是脱去在前面三步中进入细胞的二甲苯。乙醇的浓度由高到低的原因是用乙醇脱去二甲苯之后需要水洗，所以乙醇的浓度也就由高到低，使其可以循序渐进，不至于损害细胞的正常结构。接下来就是苏木素染色。苏木素染色的原理是：苏木素染液为碱性，细胞核内的染色体和胞浆中的核糖体为酸性，属酸碱结合染色。结合之后细胞核被苏木素染成蓝色。在苏木素中染色10min后，需要水洗，属于常规操作，主要是洗去残留于玻片和细胞外多余的苏木素。后面一步是用1％的盐酸酒精分化，其主要作用是可以脱去细胞内结合多余的苏木素。然后也是常规水洗至水清。最后一步就是用伊红染色。伊红属酸性染料，而胞浆属碱性。酸碱中和之后，胞浆被染成红色。而后水洗至水清。 　　到这里一张常规病理切片就完成了。 谢谢！