稳定表达细胞色素P4501A1人肝癌细胞系的建立-《中国药科大学学报.PDFVIP

中国药科大学 学 报 438 Journal of China PharmaceuticalUniversity 2006,37 (5) :438- 442 P4501A1 * 庞莉萍, 崔景荣 ( , 100083) :建立稳定表达人细胞色素 P4501A1( CYP1A1) 的人肝癌细胞系(Bel-7402) : 通过将人细胞色素 P4501A1(CYP1A1) 的表达质粒转染到人肝癌细胞系( Be-l 7402) , 经G418 抗性筛选得到稳定的克隆 扩大培养成系, Western Blotting 检测蛋白的表达细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯 蒽( D BA) 对Be-l 7402/ 1A1 细胞的增殖 抑制作用双核微核实验对Be-l 7402/ 1A1 细胞进行了遗传毒理的短期实验:转染后筛选得到的 Bel-7402 抗性克隆, Western Blotting 检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达细胞暴露于D BA 时, Be-l 7402/ 1A1与Be-l 7402 细胞相比, 细胞增殖 明显抑制双核微核试验表明Be-l 7402/ 1A1 细胞的微核率随D BA 浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化连续传代 后仍有CYP1A1标志酶EROD 的较高表达, 该酶活性能被 CYP1A1抑制剂A-萘黄酮抑制: 建立了一个新的稳定表达 CYP1A1的1 个肝癌细胞系( Be-l 7402/ CYP1A1) , 可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性该细胞系可用来筛选能被 CYP1A1代谢的化合物, 或能抑制CYP1A1 活性的化合物, 可用来研究CYP1A1的催化性质及被 CYP1A1代谢的化合物的 毒性机理 CYP1A1;Be-l 7402;稳定转染;3-甲基胆蒽;二甲基苯 蒽 Q78 A 1000- 5048(2006) 05- 0438- 05 Establishment of human hepatoma cell line expressing cytochrome P4501A1 PANG Li-ping,CUI Jing-rong N ational K ey L aboratory of Natural and Biomimetic Drugs , H ealth S cience Cente of Peking Univ ersity , B ei ing 100083 , China Abstract Aim:To establish a human hepatic carcinoma cell line (Bel-7402) which could express human cytochrome P4501A1( CYP1A1) . Methods: The recombinant plasmid containing CYP1A1 was stably transfected to Bel-7402 cells,andthe cellswerescreenedwith G418to obtain stable clone. Western Blotting was usedto detect the expression of CYP1A1protein. oreorer, cell proliferation studywas usedto analyzewhether Bel-7402/ 1A1cells could metabo- lize the polycyclic aromatichydrocarbons substrateof CYP1A1 (D BA). The short-term test of genetictoxicologywas performedwith micronucleus method. Results:Western blot showedthat the tran