糖尿病造模数据.docxVIP

1.1 实验材料1.1.1 实验动物 雄性SPF级SD大鼠，8周龄，体重：180-220g,购自广东省医学实验动物中心。1.1.2 实验材料与仪器链脲佐菌素 Sigma公司高糖高脂饲料原料广东省医学实验动物中心血糖仪及血糖试纸 德国罗氏诊断公司多聚甲醛 上海博谷生物科技有限公司 大鼠胰岛素酶联检测试剂盒 南京建成有限公司 立式压力蒸汽灭菌器 SANYO双人双面洁净工作台 苏州净化 JC101型电热鼓风干燥箱 上海成顺仪器仪表有限公司低速离心机 安徽中科中佳科技有限公司光学显微镜（BX53型） 日本，奥林巴斯Elx-800型全自动酶标仪 莱卡公司石蜡包埋机 湖北泰康医疗设备有限公司组织切片机 金华市益迪医疗设备厂1.2 Ⅱ型糖尿病大鼠的构建高糖高脂饲料的配方为：普通饲料为64％、猪油为15％、蔗糖为20％、盐为1％，委托广东省医学实验动物中心制作。SD大鼠30只，实验动物房常规饲养，室温控制在25-27℃。适应性喂养5天并观察SD大鼠无异常后，随机分组：空白对照组(n=8只)和Ⅱ型糖尿病模型组(n=20只)。空白对照组始终喂SPF级普通大鼠饲料，Ⅱ型糖尿病大鼠模形组喂养高糖高脂饲料一个月。一个月后两组中所有的大鼠12小时禁食不禁水，配置链脲佐菌素注射液：在无菌环境下将柠檬酸柠檬酸钠缓冲液进行过滤除菌，将0.5g链脲佐菌素溶于25ml的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液中混匀即为20mg/ml的STZ溶液（现配先用，避光）。Ⅱ型糖尿病模形组大鼠进行腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ，37mg／kg)，空白对照组大鼠腹腔注射等体积柠檬酸柠檬酸钠缓冲液。72 小时后检测空腹血糖，选择FBG≥16.7 mmol／L为Ⅱ型糖尿病模型的合格标准。监测3周空腹血糖的动态变化[7]。1.3 大鼠状态观察观察所有SD 大鼠的精神状态、体重和大小便等情况。1.4 口服糖耐量试验在注射STZ 4周后经空腹血糖变化稳定后进行口服糖耐量试验，两组中所有大鼠禁食12小时后，单次灌胃葡萄糖2.3g/kg,分别在0、0.5、1、2 小时后血糖试纸取尾静脉的血检测血糖[8]。1.5检测大鼠血清胰岛素检测 大鼠血清胰岛素检测是STZ注射前及3周的空腹血糖变化稳定后进行尾静脉采血后按试剂盒说明书进行检测，胰岛素抵抗的标准是：胰岛素敏感指数与对照组相比差异有显著性[8]。1.6 大鼠胰腺组织形态学检测构建Ⅱ型糖尿病模型实验结束后，采用眼球取血将部分大鼠处死，立即解剖大鼠，取大鼠胰腺组织在生理盐水中清洗干净后，以4％多聚甲醛溶液固定24小时。进行组织酒精梯度脱水：85％乙醇浸泡1h；90％乙醇浸泡2h；95％乙醇浸泡2h；无水乙醇浸泡2h。组织在树脂浸泡液中2h,梯度浸腊3h分为3次，石蜡常规包埋、切片，干燥后进行苏木素-伊红(HE)染色。HE染色步骤为：二甲苯（10分钟）、二甲苯（10分钟）、无水乙醇（2分钟）、无水乙醇（2分钟）、95％乙醇(2分钟)、90％乙醇(2分钟)、80％乙醇(2分钟)、70％乙醇(2分钟)、水洗（1分钟）、苏木素染色（5分钟）、水洗（1.5分钟）、盐酸酒精（1-2秒）、水洗（8分钟）、伊红染色（23秒）、水洗（1分钟）、70％乙醇(1-2秒)、80％乙醇(1-2秒）90％乙醇(1-2秒）、95％乙醇(1-2秒）、无水乙醇（1-2秒）、烤片、用中性树胶封片，用显微镜观察组织形态学变化。1.8 数据分析所有数据采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，P＜0.05时有统计学意义。2 结果2.1大鼠状态观察结果及指标检测结果 空白对照组的大鼠皮毛干净纯白，饮食正常，生长良好活动频繁 ，垫料干燥。模型实