新型脂肪酶基因的克隆与表达论文.pdfVIP

食品与药品 FoodandDrug 2013年第 15卷第1期 15 新型脂肪酶基因的克隆与表达 方 珊，刘浩浩，李华林，赵艳华，杨剑冰，赵 健 (华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237) 摘 要 ：目的 通过同源比对筛选黑曲霉中新型活性脂肪酶。方法 抽提黑曲霉基因组，依据从烟曲霉中获得的高活性脂肪 酶基因序列，NCBI网站序列比对后搜索到与烟 曲霉afl一1同源性较高的黑曲霉脂肪酶基因序YJlanl一1，设计引物进行PCR扩 增，产物胶 回收后连接至PMD18T载体，测序验证正确后将 目的序列连接至表达载体PET28a，转化EscherichiacoliBL21 fDE3)qb表达和测定活性。 结果 克隆了一种来源于黑曲霉新型脂肪酶基因an1．1， 15℃表达条件下主要为可溶性表达， 对C4底物 (对硝基苯酚丁酸酯)活性达2365UL／。结论 同源序列比对能有效提高筛选效率，并从黑曲霉中筛选到一种新 的脂肪酶基因，在大肠杆菌中可高表达并具有生物学活性。 关键词：同源比对；黑曲霉；重组脂肪酶；表达；活性 中