葡萄膜炎患者外周血单个核细胞TLR9、TLR7 mRNA的表达及意义论文.docVIP

　　葡萄膜炎患者外周血单个核细胞TLR9、TLR7 mRNA的表达及意义论文 丁歆 付琳琳 苏稚辉 刘钢 方桂英 【摘要】 目的 观察葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体9（TLR9）、Toll样受体7（TLR7）mRNA的表达。方法 收集42例葡萄膜炎患者（其中发病与感染相关者12例,与感染无关者30例)和正常对照组（30例)外周血,采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离PBMCs,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs TLR9、TLR7 mRNA表达的相对含量。结果 与感染相关葡萄膜炎患者PBMCs TLR9、TLR7 mRNA相对含量显著高于与感染无关葡萄膜炎患者和正常对照组(P 0.01)，与感染无关葡萄膜炎患者与正常对照组比较TLR9、TLR7 mRNA相对含量差异无统计学意义(P 0.05)。结论 TLR9、TLR97的表达在与感染相关葡萄膜炎患者中显著升高,提示感染因素在葡萄膜炎中的作用可能通过TLR9、TLR7介导。 【关键词】 葡萄膜炎;外周血单个核细胞;TLR9;TLR7 Abstract: Objective To investigate the expression of TLR9 and TLR7 mRNA of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in patients 42 uveitis patients (12 patients ine the relative content of the expression of TLR9 mRNA and TLR7 mRNA of the PBMCs. Results The relative content of expression of TLR9 mRNA and TLR7 mRNA RNA and TLR7 mRNA betRNA and TLR7 mRNA in uveitis patients associated ight be mediated by TLR9 and TLR7. Key ononuclear cells; TLR9; TLR7 葡萄膜炎是一种T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病，多发生于青壮年，易反复发作，治疗棘手，为致盲的主要原因之一。近年的研究表明，Th1型免疫反应在葡萄膜炎中起主导作用［1］。Toll样受体( Toll-like receptors, TLRs)是近年来备受关注的一种细胞表面信号传导跨膜受体，在识别细菌等病原微生物及介导的炎症反应信号通路中有重要作用.freelRNA表达情况。 1 资料和方法 1.1 一般资料和分组 42例葡萄膜炎患者选自东南大学附属徐州市中心医院眼科门诊及住院患者,经专科检查，诊断明确，包括前葡萄膜炎28例，后葡萄膜炎6例，全葡萄膜炎8例。年龄为9～61岁，平均(27.0±1.6)岁。其中明确发病与感染有关者（与感染相关组）共12例，与感染无关者（与感染无关组）30例。检测前,患者至少1个月内未接受糖皮质激素、免疫抑制剂或具有免疫调节作用的药物治疗。健康志愿者30例为对照组，年龄为8～60岁，平均（29.0±1.8）岁。 1.2 主要试剂 人淋巴细胞分离液、Ficoll Taq DNA聚合酶(北京鼎国生物技术有限公司),DEPC(Sigma公司),Trizol试剂(Intrivogen公司),Rever Tra Ace逆转录酶(TOYOBO生物科技公司)。 1.3 实验方法 1.3.1 PBMCs的分离 抽取研究对象清晨空腹静脉血15 ml,Ficoll法分离PBMCs。 1.3.2 PBMCs总RNA的提取 用Trizol-氯仿-异丙醇-乙醇法提取PBMCs总RNA。 1.3.3 RT-PCR检测TLR9、TLR7表达 1.3.3.1 逆转录反应合成cDNA 取RNA 1 μg加入oligo T 1 μl,5×Buffer 4 μl,.freelmol/L dNTP 2 μl,RNA酶抑制剂1 μl,DEPC水加至20 μl。反应条件：42℃ 20 min，99℃ 5 min,4℃ 5 min。 1.3.3.2 PCR检测TLR9、TLR7 mRNA表达相对含量 TLR9、TLR7、GAPDH的引物序列设计应用在线引物设计软件Primer 3.0，由上海博亚生有限公司合成。具体序列见表1。扩增体系及反应条件:取2 μl cDNA,5 μl 10×PCR Buffer,2 μl dNTPs,上游、下游引物各2 μl、1 μl Taq酶,加灭菌双蒸水至总体积50 μl;94℃ 5 min预变性,94℃ 30 s,56℃ 30 s